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本文导读目录：

1、人参 白术 干姜 甘草

2、人参 白术 茯苓 甘草

3、人参 白术

4、人参 百度百科(人参 百科)

5、人参 百科(人参属中药)

人参 白术 干姜 甘草 ♂

人参 白术 干姜 甘草   22.人参 白术 干姜 甘草 : 【中医理论】
人参、干姜、甘草(炙)、白术各三两,上四味,捣筛,蜜和为丸,如鸡子黄许大,以沸汤数合和一丸,研碎,温服,称理中丸,也可水煮温服。作汤济,又称理中汤,金匮要略中称人参汤。载于《伤寒论》。主治脾胃虚寒证。干姜大辛大热,归经脾胃,温中祛寒,扶阳抑阴,人参甘温入脾,补中益气,培补后天之本,气旺而阳亦复。白术甘苦温燥,燥温健脾,健运中州,甘草蜜炙,性温具补,补脾益气,四药温补并行,以温为主。共呈温中健脾功效,使寒气去,阳气复,中气得补,健运有权,中焦虚寒诸证自除矣。
【药理研究】
1.对离体小肠平滑肌的作用^[1]
对家兔十二指肠自发活动的影响随剂量增加而增强,小剂量0.1ml时无明显作用,当加至0.2ml时呈抑制作用,表现为收缩幅度减弱,频率减少,其抑制百分率为10.52±7.72(n=10),当剂量增加至0.4ml时,其抑制作用加强,抑制百分率上升至38.85±5.54(n=8),呈明显的量效关系。理中汤能缓解乙酰胆碱、氯化钡所引起的肠管强直性收缩,表现为紧张性下降,收缩幅度减少,结果见表12-22-1。盐酸肾上腺素(10-4,0.1ml)对肠管的抑制作用表现为收缩幅度下降、肌张力降低,在加入理中汤0.4ml后,有4段肠管活动未见恢复,有4段肠管活动略有恢复,其拮抗百分率在10%左右。

表12-22-1 理中汤拮抗乙酰胆碱、氯化钡的作用

2.对胃肠运动的影响
2.1 对正常小鼠小肠推进运动的影响^[1]
理中汤(含0.5g/ml生药)在0.2ml/g体重剂量下能够抑制正常小鼠的小肠推进运动,使推进百分率明显下降,差异有高度显著性。
2.2 对大黄脾虚小鼠小肠推进运动的影响^[1]
大黄脾虚模型:用100%大黄煎剂灌胃,每只小鼠0.5ml/d,共7d。第8d起随机分为2组,对照组给生理盐水,给药组灌服理中汤,每10g体重0.2ml,每日1次,第5d给药后2h进行小肠推进试验。造模次日即见小鼠大便稀烂,后日渐消瘦、蜷缩、松毛无光、群聚等。经给理中汤后各种症状均有改善,较对照组恢复为好。给药第5d进行小肠推进运动试验。结果表明理中汤能明显抑制大黄脾虚小鼠的小肠推进运动亢进,差异有非常显著意义。
2.3 对阿托品负荷小鼠小肠推进运动的影响^[1]
阿托品负荷:将小鼠随机分为2组,1组给以生理盐水,另1组给以理中汤,剂量同前。第5d给药后2h,腹腔注射阿托品0.1mg/10g体重,然后立即进行小肠推进试验。在其负荷下,理中汤可使小肠推进运动受抑加强,与对照组相比差异有高度显著性,见表12-22-2。

表12-22-2 理中汤对小鼠小肠运动的影响

与生理盐水组比较:* * P<0.01
2.4 对新斯的明负荷小鼠小肠推进运动的影响
新斯的明负荷:前期处理同上,第5d给药后2h,皮下注射新斯的明1.2μg/10g体重,5min后进行小肠推进试验。新斯的明负荷后,小鼠小肠运动加强,推进百分率升高,理中汤能够拮抗新斯的明的作用,使推进百分率下降,与对照组比较,差异有高度显著性。
3.对胃溃疡的保护作用
3.1 对大鼠幽门结扎型胃溃疡的保护性作用^[2]
将24只大鼠(雌雄各半)分别按体重随机分人理中汤组、空白对照组,每组12只,按组别分别胃饲给予相应药物,体重200g,以上者4ml/次,体重200g以下者3ml/次,每日1次,连续给药6d。于末次给药后次日开始禁食供水48h,然后乙醚吸入麻醉,剪毛,常规消毒,开腹行幽门结扎术造成胃溃疡。术后禁食禁水24h,全部颈椎脱臼处死。
对溃疡灶数的影响:如表12-22-3,理中汤组溃疡灶数少于对照组,统计学处理有显著性意义(0.01<P<0.05)。

表12-22-3 理中汤对大鼠幽门结扎型胃溃疡灶数的影响(x±s)

注:两组实验中因操作失误各死亡1只
对溃疡面积的影响:如表12-22-4,理中汤组溃疡面积小于对照组,相差有显著性差异(0.01<P<0.05)。

表12-22-4 理中汤对大鼠幽门结扎型胃溃疡面积的影响(x±s)

对胃液检测各指标的影响:如表12-22-5,理中汤组游离酸度较对照组低,统计学处理有显著性意义(0.01<P<0.05);而胃液总量、总酸度、胃蛋白酶活性两组之间均无显著性差异(P>0.05)。

表12-22-5理中汤对大鼠幽门结扎型胃溃疡胃液的影响(x±s)

*与对照组比较:P<0.05
3.2对大鼠醋酸型胃溃疡愈合的影响^[2]
将26只大鼠(雌雄各半)禁食24h后,用乙醚吸入麻醉,常规消毒后开腹行醋酸擦抹造成胃溃疡病理模型(改良Okabe法)。将模型成功的22只动物(雄12只、雌10只)分别按体重随机分入理中汤组、生理盐水(空白对照)组,每组11只,术后第3天开始胃饲给予相应药物,动物体重200g以上者药量为4ml/次,体重200以下者3ml/次,每日1次,连续给药10d,末次给药24h后全部拉颈处死。
胃标本外观:胃溃疡呈火山口样,周缘隆起,中心凹陷,为典型的胃溃疡病变外观,病变周围粘膜组织发白,与溃疡灶相对的浆膜上有大网膜包裹。理中汤组有两个标本溃疡已完全愈合平复,仅患处微微发白。
对胃溃疡面积的影响如表12-22-6所示,理中汤组动物胃溃疡面积明显小于对照组,统计学处理有极显著差异(P<0.01),说明理中汤对实验性胃溃疡的愈合有明显促进作用。

表12-22-6 理中汤对大鼠醋酸型胃溃疡面积的影响(x±s)

4.对植物神经功能的影响
经临床研究表明,脾胃阳虚病证者内脏副交感神经兴奋占优势,血中胆碱脂酶活性增高,X线钡餐检查胃张力增高。用理中汤为主进行治疗后可使胆碱脂酶活性降低,内脏副交感神经占优势的情况得到改善^[3]。
5.对物质代谢的影响
5.1 对糖代谢的影响
对四氧嘧啶所致的小鼠外源性糖尿病腹腔给药,可使其血糖明显降低:对遗传性糖尿病小鼠,在禁食条件下有明显的降血糖作用,而非禁食时则无此作用^[3]。
5.2 对蛋白代谢的影响
理中汤对脾阳虚动物大小肠白蛋白代谢的亢进现象有显著的调节作用。用利血平加更生霉素给小鼠行腹腔注射造成类脾阳虚动物模型。经测定这种动物模型的小鼠,其机体为适应利血平的刺激,加速了蛋白代谢,肝脏、大小肠组织蛋白合成率明显增高。用本药治疗1次后,可使大肠蛋白质合成率明显下降,连续多次给药可使大肠和小肠的蛋白合成速率均显著下降,接近于正常水平。但无论一次或多次连续给药,对肝脏蛋白质合成不仅无降低作用,反而均呈增加趋势。对正常小鼠的测定表明,本药能提高肝脏及十二指肠蛋白质的合成率。但若以党参代替人参,则对正常和脾阳虚动物肝脏蛋白合成均无促进作用,但可使脾虚动物十二指肠蛋白质合成率显著增加^[3]。
6.对免疫功能的影响
对HIV感染者,口服人参汤7.5g/d(分3次服),进行末梢血生化学、血清学检查,并测定了淋巴细胞亚群及淋巴细胞幼稚化反应,结果:淋巴细胞在1～3个月增加,平均最大增加率为41.9±15.9%(m±s),6个月为0.54±13.6%,其后不再增加。CD4和CD8细胞在2～3个月增加,6个月为服药前值。CD4/CD8比值无显著变化。辅助T细胞,活性化T细胞,细胞毒性T细胞,NK细胞增加。淋巴细胞幼稚化反应(PHA)显示一时性亢进。认为可期待其对HIV感者免疫功能的恢复发挥作用^[4]。如长期投与,口服1～4年9个月,结果:CD4/CD8比值上升者4例,但CD4实数均下降,HIV-IP24抗原出现者只有2例,9例至今仍为阴性。HIV-IP24抗体降低者只有2例,9例抗体保持100%以上。并且临床症状比较稳定,认为这是长期投与的结果^[5]。由日本13个单位共同对HIV感染者56人进行了临床观察,其中25例服人参汤7.5g/d,结果表明,投与人参汤可改善HIV感染患者的免疫功能,成人患者的平均体重有所增加,具有维持或改善HIV感染导致低下的免疫功能的作用^[6]。理中汤能刺激健康人淋巴细胞转化^[7],提高阳虚小鼠巨噬细胞的吞噬功能^[8]。
通过对日本血友病患者投与HIV阳性的血液制剂,推测虽不发病,而无症状带病毒者和处于ARC状态者相当多。为防止这些人进展为AIDS,投与抗病毒剂和免疫激活剂是有意义的。汉方方剂的特征是长期口服几乎无副作用,最近发现一些汉方方剂有免疫激活作用,已引起注意,并试用于病毒性肝炎,呼吸系统疾患,机会感染或者恶性肿瘤等的治疗。故以4种汉方方剂(小柴胡汤、人参汤、补中益气汤及十全大补汤)对小鼠免疫功能的影响,以NK细胞的活性,脾细胞的有丝分裂刺激素活性,对羊红细胞抗体生成功能及T细胞亚群的消长作为指标进行研究。NK细胞活性:腹腔内投与人参汤的各剂量组活性上升。小柴胡汤仅100mg/kg组上升,而200mg/kg组活性受到抑制。经口投与小柴胡汤只是250mg/kg组的活性上升。以人参汤250mg/kg组投与时间延长到20日者活性上升。T细胞亚群的消长:投与水的对照组的L3T4阳性与Lyt-2阳性细胞之比2.26～2.60。小柴胡汤250mg/kg投与组其比值上升为3.09,但这不是由于L3 T4阳性细胞的增加,而是因为Lyt- 2阳性细胞减少。补中益气汤(250mg/kg)及十全大补汤(500 mg/kg)组,其比值虽无明显变化,但比非投药组,两T细胞亚群显示增加倾向。人参汤对此影响不显著。有丝分裂刺激素活性:用脾细胞时,在50 ～100 μg/ml范围内,十全大补汤组胸腺嘧啶脱 氧核苷的摄取轻度上升。其他三种方剂的胸腺嘧啶脱氧核苷的摄取明显上升。几个方剂在B细胞组分也都见有这种情况,显示出作为B细胞有丝分裂刺激素的作用。抗羊红细胞抗体产生:只研究了小柴胡汤。投与250 mg/kg组溶血斑增加,投与750 mg/kg组反而减少。血清抗体效价以投与250mg/kg组最高。观察使用四种汉方方剂对小鼠免疫功能的效果,由于浓度不同而显示不同的作用。如选用适当的浓度,可提高NK细胞活性,影响T细胞亚群的消长,有作为B细胞有丝分裂刺激素的作用,还可促进抗体的产生^[9]。
7.超氧化物歧化酶活性及血清脂质过氧化物含量的影响
选健康19月龄的Wistar大鼠20只,体重约500 g随机分为实验组和对照组,对照组给普通饲料,实验组给普通饲料与人参汤。人参汤每公斤体重给药10 g(2 ml),每日1次,连续给药6周后处死,取血2 ml,3 000 r/min离心10 min,分离血清测红细胞超氧化物歧化酶(SOD)及脂质过氧化物(LPO)。人参汤:人参60 g,白术60 g,甘草60 g,干姜60 g。将上药研碎,水煎,过滤,将其水煎液浓缩成5g/ ml的药液。实验结果表明,连续给6周后,大鼠红细胞中的SOD活性高于对照组,两组比较,有显著性意义。血清LPO含量,人参汤组低于对照组,两组比较有极显著意义,见表12-22-7^[10]]。

表12-22-7 实验大鼠红细胞SOD 活性及血清LPO含量比较

人参汤(理中汤)对缺血处死的大白兔心、脑、肺等组织匀浆液中的脂质过氧化物含量有明显的降低作用,提示人参汤(理中汤)有抗氧化,抑制脂质过氧化反应,从而保护细胞免受损伤的作用。人参汤组每管加人参汤80μl,对照组每管加生理盐水80μl ,在37℃下培养1 h,再经一定的处理后用分光光度计,在535 nm波长下分别测定光密度,最后用四乙氧基丙烷为标准品计算各管脂质过氧化物的含量(用nmol/MDA丙二醛表示)。结果表明,人参汤组心、脑、肺、肝、肾组织匀浆液脂质过氧化物的含量分别为25.69±2.74、76.13±3.38、24.73±2.14、29.36± 3.17、26.87± 2.80;对照组分别为:30.17±2.38、80.34±3.13、27.65±2.18、35.13±2.77、31.47±2.83。两组相比差异显著(P值分别:<0.01,<0.05,<0.05,<0.01,<0.01)。近来年研究表明,缺血组织可产生大量的氧自由基,氧自由基可作用于生物膜中的不饱和脂肪酸,起动脂质过氧化反应,导致细胞形态与功能的损害。人参汤抑制脂质过氧化反应的作用与其临床治疗冠心病有相关性^[11]。
8.对精子运动的影响
在进行人工授精时,取精子运动率在60%以下的精液共30例作研究对象,用帕科尔(Pacol)脱氢法将精子浓缩、洗净后,添加人参汤的提取剂,对照组添加生理盐水,立即用运动功能自动分析仪(HFM 2030)测定精子运动率、运动速度、直进性及精子头部的振幅等,还观察了添加药物后的经时变化。结果,精子运动率:人参汤组为44.2±4.3%,对照组为35.1±2.9%。二组相比显示有意义的效果;添加药物后观察4 h,精子运动率的减少率与对照组相比无差异。精子运动速度、直进性等,添加药物后未见明显的变化。以上结果显示,人参汤对精子运动功能上升有直接效果,其效果比维持运动功能更具有即刻见效性,而且与运动功能质的改善也有关系,今后有用于临床的可能性^[12]。
9.对腹部体温的影响
临床儿科研究表明:人参汤对腹部寒冷具有温暖作用,而对温暖的腹部则没有升温作用。对23例诊断为胃肠炎的患儿测量胸、腹部体温2次以上,治疗前腹部体温与胸部体温相比低于0.4℃者为A组(6例),虽低于但未至0.4℃者为C组(17例)。人参汤用量为每天0.1～0.2g/kg,用药后观察得出,A组用药前,腹部体温(34.2±1.1℃)明显低于胸部体温(35.4±0.4℃),而用药后腹部体温改善(35.5±1.1℃),胸部体温基本不变(35.1±0.9℃)。C组胸、腹部体温用药前后未出现明显变化。故此认为本方对伴有里寒证的小儿胃肠炎治疗有效^[13]。
10.对肾上腺皮质功能的影响
对肾上腺皮质功能有一定调整作用。吴涛等报道,对服用本方有脾阳虚患者测定尿中17羟、17酮含量表明本方有显著增加其含量的作用,从而说明理中汤对肾上腺皮质功能有一定调整功能^[14,15]。
11.对肾功能的影响
临床研究表明本方有一定的改善肾脏衰竭防止肾功能减退的作用。对服用人参汤(理中汤)合大黄甘草汤的慢性肾功能不全而未进行血液透析的患者,测定治疗的第1个月中血尿素氮(BUN)下降,之后水平保持恒定,没有明显改变。测定服药后1～3个月血清肌苷值下降,之后逐渐增加,在第6个月时恢复到治疗前的水平,此后水平呈稳定状态。治疗前后外周血液红细胞和血细胞比容,白蛋白和血清总蛋白水平无变化^[16]。
【临床应用】
1.治疗心血管疾病
1.1 治疗冠心病心绞痛^[17]
选择门诊病人,确诊为冠心病心绞痛患者88例,男36例,女24例,平均年龄54.6±10.2岁。治疗组60例,对照组28例。所有病人均有心绞痛发作史及缺血性ST-T改变。有下列情况者不列入本观察范围:不稳定型心绞痛;急性心肌梗死;影响心电图确诊心肌缺血的病例,如LBBB、WPW等;心功能第三、四级;有严重的心脏其他器质性疾病患者;有出血倾向者。另选10例健康人作正常对照。
所有入选病人治疗前停用有关心血管药物5个半衰期或1周,硝酸甘油可在心绞痛发作时临时服用,并记录用量。治疗组用四逆加人参汤:黑附子9g,干姜6g,甘草6g,红参5g;黑附子先煎30min,再加水至400ml,加入干姜、甘草同煎至150ml,红参另煎50ml,混兑后分两次口服,时间间隔为6～10h,每日1剂,疗程为2周。对照组冠心苏合胶囊,每日3次,每次2粒。每2～3d详细询问记录患者的临床症状,包括心绞痛次数、程度及持续时间。用药前后查12导联心电图。NST即12导联中ST段压低的导联数,∑ST即12导联中ST段压低的总和。治疗前后测定全血粘度、血浆粘度、红细胞压积,纤维蛋白原。
根据1979年全国中西医结合治疗冠心病心绞痛及心律失常座谈会制订标准判断心绞痛和心电图疗效。
结果:四逆加人参汤控制心绞痛发作显效20例,占33.3%;改善28例,占46.7%;无效12例,占20%;加重0例。总有效率80%(48/60)。冠心苏合胶囊控制心绞痛发作显效8例,占28.6%;改善14例,占50.0%;无效6例,占21.4%;加重0例。四逆加人参汤心电图ST-T改变显效12例,占20%;改善28例,占46.7%;无改变20例,占33.3%;加重0例。总有效率66.7%(40/60)。冠心苏合胶囊心电图ST-T改变显效5例,占17.9%;改善13例,占46.4%;无改变10例,占35.7%;加重0例。四逆加人参汤治疗后见表12-22-8,平均心绞痛发作次数、持续时间及硝酸甘油用量均明显减少(P<0.01、0.01、0.05),NST和∑ST均显著下降(P均<0.05)。
四逆加人参汤对冠心病心绞痛患者血液流变学的影响,见表12-22-9。服用四逆加人参汤煎剂两周后,患者血液流变学生了明显的变化,全血粘度、血浆粘度、红细胞压积、纤维蛋白较治疗前明显下降(P<0.05,0.01)。

表12-22-8 四逆加人参汤治疗前后患者症状和心电图变化

与治疗前对比:* P<0.05,* * P<0.01

表12-22-9 四逆加人参汤治疗前后患者的血液流变学变化

与治疗前对比:* P< 0.05,* * P<0.01
秦氏等[18]选择门诊和住院患者85人,均确认为冠心病心绞痛,男48例,女37例,平均年龄56.9±8.2岁:所有病人均有典型心绞痛发作史及缺血性ST-T改变。将病人随机分为治疗组和对照组,治疗组45例,对照组40例,有下列情况者不列入 本观察范围:不稳定型心绞痛;急性心肌梗塞;影响心电图确诊心肌缺血的病例,如LBBB、WPW等;心功能第3、4级;有严重的心脏其他器质性疾病患者;有出血倾向者。另选10例健康人作正常对照。所有人选病人治疗前停用有关心血管药物5个半衰期或1周,硝酸甘油可在心绞痛发作时临时服用,并记录用量。治疗期不用维生素C、维生素E等抗氧化剂。治疗组用四逆加人参汤:黑附子9 g,干姜6 g,红参5 g。黑附子先煎30 min,再加水至200 ml,加入干姜、甘草同煎至100 ml,红参另煎30 ml。 混兑后分2次口服,时间间隔为6～8h,每日1剂,疗程为2周。对照组用复方丹参片治疗,每日3次,每次3粒,治疗为2周。每2～3 d详细询问记录患者的临床症状,包括心绞痛次数、程度及持续时间。用药前后查12导联心电图。NST即12导联中ST段压低的导联数,∑ST即12导联中ST段压低的总和。治疗前后测定SOD活性和丙二醛(MDA)含量各1次。SOD活性用邻苯三酚法测定,MDA用八木法(TBA法)测定。实验结果用t检验进行显著性检测。疗效标准:根据全国中西医结合治疗冠心病心绞痛及心律失常座谈会制定标准,判断心绞痛和心电图疗效。
结果:治疗组四逆加人参汤控制心绞痛发作显效14例,占31.1%;改善22例,占48.9%;无效9例,占20%;加重0例,总有效率为80%。心电图ST-T改变显效12例,占26.7%;改善19例,占42.2%;无改变14例,占31.1%;加重0例,总有效率为68.9%。对照组复方丹参片控制心绞痛发作显效9例,占22.5%;改善17例,占42.5%;无效14例,占35%;加重0例,总有效率为65%。心电图ST-T改变显效8例,占20%;改善15例,占37.5%;无改变17例,占42.5%;加重0例。总有效率57.5%。四逆加人参汤治疗后(见表12-22-10),平均心绞痛发作次数、持续时间及硝酸甘油用量均明显减少(P均<0.01),NST和∑ST均显著下降(P均<0.01),从表中可以看出,复方丹参片对患者症状和心电图亦有一定的效果。

表12-22-10 四逆加人参汤治疗前后患者症状和心电图变化(x±s)

与治疗前对比:* * P<0.01

人参 白术 茯苓 甘草 ♂

人参 白术 茯苓 甘草   3.人参 白术 茯苓 甘草 : 【中医理论】
人参(去芦)、白术、茯苓(去皮)、甘草(炙)各等份。又名四君子汤,载《太平惠民和剂局方》,用于脾胃气虚证。人参甘温益气,健脾养胃,白术苦温,健脾燥湿,加强益气助运之力,茯苓甘淡,健脾渗湿,苓、术合用,则健脾祛湿之功更显。炙甘草甘温,益气和中,调和诸药,四药配伍,共奏益气健脾之功,能使脾胃之气健旺,运化复常,资生气血,故为补气的基本方。后世以补气健脾为主的许多方剂,多从本方发展而来。如异功散为四君子汤加陈皮而成,芳香健脾醒胃,使甘温缓补更兼理气健脾之功。再加半夏为六君子汤,《名医方论》张璐言:“气虚者,补之以甘。参、术、苓、草,甘温益胃,有健运之功,具冲和之德,故为君子。益人之一身,以胃气为本,胃气旺,则五脏受荫;胃气伤,则百病丛生,故凡病久不愈,诸药不效者,惟有益胃补肾两途,故用四君子随证加减。”也临床实际应用有以党参代人参使用,也称四君子汤。
【药理研究】
1.显微鉴别
取本品丸剂,置显微镜下观察:不规则分枝状团块无色,遇水合氯醛液溶化;菌丝无色或淡棕色,直径4～6μm。联结乳管直径12～15μm,含细小颗粒状物。草酸钙针晶细小,长10～32μm,不规则地充塞于薄壁细胞中,纤维束周围薄壁细胞含草酸钙方晶,形成晶纤维^[1]。
2.薄层色谱鉴别
2.1 四君子丸中白术的薄层色谱鉴别方法
取丸剂2g,研碎,加正己烷10ml,超声处理15min,滤过,滤液挥干,残渣加正己烷1ml使溶解,作为供试品溶液。另取白术对照药材0.2g,加正己烷2ml,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱试验,吸取上述制备的两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(60～90℃)一醋酸乙酯(20:0.1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点^[1]。
2.2 四君子丸中甘草酸薄层色谱鉴别方法
取丸剂5g,研碎,加水40ml,煎煮30min,滤过,滤液用正丁醇振摇提取3次,每次15ml,合并正丁醇液,用水洗涤3次,每次10ml,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇0.5ml使溶解,作为供试品溶液。另取甘草对照药材0.5g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验,吸收供试品溶液4μl,对照药材溶液1μl,分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上,以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15:1:1:2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃烘至斑点显色清晰,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
2.3 四君子汤薄层扫描特征指纹图谱的研究^[2]
张莅峡等选用了薄层扫描中的三种检测方式:荧光检测,紫外光检测,可见光检测(包括显色前后的测定),在同一块层离板上,可以同时获得四种不同的四君子汤的薄层扫描的特征峰指纹图谱。通过单味药与成药进行阴阳双对照,可以确认白术、甘草和党参的存在。四君子汤提取液:按处方标示量,分别称取经粉碎(过40目筛)的四种单味药,混匀后,放入磨口三角瓶中,加一定量的95%乙醇溶液,将磨口三角瓶置于超声清洗器中,超声1.5h后,将药液与药渣转移至离心管中,进行离心分离,分取上清液置具塞容器中,备用(表12-3-1)。阴、阳对照液的制备:按处方(中国药典一部)比例称取一定量。分别在各种阴、阳对照品中,加入一定量乙醇,参照上述四君子汤提取相同的提取方法提取,超声,离心,分取上清液备用。
表12-3-1 四君子汤阴、阳对照液的制备(单位g)

薄层板的制备:称取6g硅胶GF254,加入0.3%CMC-NA水溶液18 ml,经充分研磨后,均匀地涂布在20cm×20 cm玻璃板上,薄层厚度约0.25mm,在室温25℃下自然风干后,置105℃烘箱中活化2h,放干燥处备用。
展开剂:a.氯仿-甲醇-水(15:10:6)下层;b.氯仿-甲醇-水(11:6:2)下层。饱和时间:20min。展开方式:倾斜上行法。展开时间:1 h。展距:12～13 cm。将样品溶液及阴、阳对照液分别量取5μl,点样,将板置于层析缸中,按上述层离条件进行层离。层析完毕后,将板置通风厨中,待溶媒挥散尽后,取出,待鉴定。扫描条件见表 12-3-2。

表12-3-2 薄层扫描条件

薄层扫描图中特征峰的归属见表12-3-3,表12-3-4,表12-3-5。

表12-3-3 四君子汤荧光薄层扫描图谱中特征峰的归属

表12-3-4 四君子汤紫外光薄层扫描图谱中特征峰的归属

表12-3-5 四君子汤可见光薄层扫描图谱中特征峰的归属

注:展开剂②,10%硫酸-乙醇显色
综述实验可见:实验选择了多种展开剂系统,经比较,确认氯仿-甲醇-水(15:10:6)和正丁醇-乙醇-氨水(3mol)(5:1:2)两种展开剂所获得的图谱清晰,特征性较强,比较理想,鉴于前者比后者稍节约时间,因而选择了前者为实验的展开剂。而对于党参的检出,虽用展开剂a亦可以检出,但不如将此体系比例调整为氯仿-甲醇-水(11:16:2)检出更清晰。因此在鉴定中选用了两种比例的氯仿-甲醇-水体系作展开剂。实验选用了超声浸提技术,并与热提法作了对比,无论从紫外检测、荧光检测,或是可见光检测图谱上看,二法提取的组分从图的形状、峰强度及其峰的数目基本一致。对于传统中药方剂分析,在同一块层离板上可以获得4种不同的四君子汤的薄层扫描指纹图谱。以荧光检测所获得的图谱灵敏度最高、特征性和选择性强,特别对于甘草的鉴定十分灵敏,并可鉴别白术。紫外光检测灵敏度不如荧光,但图谱别具特征,可鉴别白术和甘草。未显色前的可见光检测,主要可识别甘草;用10%硫酸-乙醇液和10%磷钼酸显色后所获得的可见光薄层扫描图,鉴定党参是十分有利。由4种不同检测方式所获得4种图谱,各具特色,可以从不同角度多层次地认识四君子汤的总体面貌,从而加深对复杂的、多组分的中药的客观认识,进而了解其多组分间的相互关系,使薄层扫描研究传统中药的方法上得到充实和提高。在实验中,选择λS285 nm/λR400 nm作为紫外光检测波长,对于炙甘草阳性对照液可以观察到8个较明显的峰,当波长为λS260 nm/λR400nm时,却多出现了4个倒峰,十分明显,这4个倒峰也是炙甘草的特征峰,在四君子汤的薄层扫描图上同样出现。在中药方剂研究中可充分利用多种信息,以满足不同需求。以薄层扫描法鉴定了四君子汤中的三味中药的客观存在,茯苓在上述条件下,不具备较特征的峰。
3.含量测定
3.1 四君子汤中黄酮类化合物的含量测定(比色法)^[3]
分析样品制备:称取党参、白术、茯苓各5g,甘草2.5g。加蒸馏水200ml,浸泡20min。分别煎煮20、30、40、50 min,趁热过滤,收集滤液。各重煎煮1次。合并两次滤液使成200 ml,放置过夜。取此煎液10 ml,离心20 min(1000 r/min),备用。
样品测定:取上述分析样品2.5 ml,加蒸馏水2.5 ml稀释,再分别加入0.1 mol/L三氯化铝溶液3 ml和1 mol/L醋酸钾溶液5 ml,放置40 min,于415 nm处比色。记录吸收度值,以吸收值查标准曲线得查表浓度,按
下式煎液黄酮类含量=
3.2 四君子汤中甘草酸的含量测定(高效液相色谱法)^[4]
样品制备:取党参、白术、茯苓各10 g,甘草5 g,加蒸馏水浸20 min,前煮30 min,过滤,重煎1次,合并2次滤液,适当浓缩后离心(1 000 r/min)15 min,最后使上清液成35 ml,(即1m药液相当于1 g原生药)备用。
标准曲线制备:取甘草酸单铵盐分别配制成浓度为0.0446、0.0892、0.1338、0.1784 mg/ml。于UVλ249 nm处、流动相为甲醇-水(60:40)、流速20 ml/min,进样量20μl、ODS柱、压力1980psi进行测定,记录峰高值,以浓度为横坐标,峰高值为纵坐标,绘制标准曲线(未进样时吸收度为0)。在实验浓度范围内测定,线性关系良好,回归方程Y(h)=97.44X(c)-0.07,r=0.9999。
样品测定:取制备好的分析样品0.5ml,以脱气后的甲醇-水(60:40)稀释至50ml,经硅镁吸附剂小柱过滤。取此滤液20μl于色谱仪上测定,流动相甲醇-水(60:40)、流速2.0 ml/min、ODS柱、压力1980psi、测定波长249 nm,测定结果按下式计算结果。结果见表12-3-6。

表12-3-6 四君子汤水煎液中甘草酸的含量测定结果

加样回收实验:在第一个样品中加入标准品,测定其回收率,加入浓度为0.08384mg/ml,结果见表12-3-7。

表12-3-7 加样回收率测定结果

注:加入量为0.08384mg/ml
不同煎煮时间的四君子汤水煎液中甘草酸的含量比较:煎煮时间分别为10、20、30、40、60min。其余方法如前,测定结果见表12-3-8。

表12-3-8 不同煎煮时间对四君子汤甘草酸含量的影响

实验表明,不同煎煮时间对四君子汤水煎液中甘草酸的含量有影响,即煎煮时间由10～30min呈增加趋势,40min后呈平缓下降。这种变化在黄酮类化合物的含量测定中亦可见到。造成此种变化的原因,可能是茯苓中大量淀粉随着煎煮时间的延长,其糊化程度亦随着增加,水煎液中的吸附和包容现象均增加所致。
3.3 四君子汤中总氮量和还原糖定量分析^[5]
四君子汤:人参(红参)、茯苓、白术、甘草各6g。四物汤:当归、川芎、白芍、熟地各6g。八珍汤:人参、茯苓、白术、甘草、当归、川芎、白芍、熟地各6g,生姜3片,大枣2枚。
总氮量测定:将上述各方分别置于500ml的烧杯中,依次加入250ml、250ml和350ml的蒸馏水中,浸泡30min,煎煮,第1次煎煮50min后,取出煎液,过滤,药渣加入蒸馏水继续煎煮40min,过滤,合并2次煎液,抽滤后分别于500ml容量瓶中,定容后得供试液。取供试液20ml于消化管中,微火蒸发水分,同时加入H2SO48ml,在150℃消化2h后,转入450℃的温度下继续消化3h后,用适量蒸馏水溶解洗涤后于25ml的容量瓶中定容,取试液于自动凯氏定氮仪上测定,结果为四君子汤:6.46mg/g,八珍汤:5.83mg/g,四物汤:5.55mg/g。从总氮量的测定结果来看,四君子汤、四物汤、八珍汤中均含有丰富的蛋白质、氨基酸,其中以四君子汤中最高,八珍汤中次之,四珍汤中为低。
还原糖的测定:分别按四君子汤、四物汤、八珍汤的药物剂量之半精密称定后组成各方,置于烧杯中,各加85%的乙醇溶液20 ml,然后水浴加热(55℃)浸提2h,将浸提液取出,每样重复3次,合并3次提取液,并用蒸馏水定容于1000 ml的容量瓶中,精取20 ml提取液于烧杯中,在55℃的水浴中蒸干,加入300 ml蒸馏水溶解,加1 g活性碳脱色过滤,滤液呈无色透明,将活性碳漂洗几次,然后定容于500 ml容量瓶中,留作比色测定。取供试液1.00 ml放于试管中,加入5%苯酚液1.00 ml,再迅速加入5.00 ml浓硫酸。此时溶液呈淡黄色,冷却,摇匀,在490 nm处进行比色测定含量,结果为四君子汤:19.6%,四物汤:32.6%,八珍汤:27.5%。从还原糖的分析结果来看,以四物汤中含糖量为最高,八珍汤中次之,四君子汤为最低,可能与四物汤、八珍汤中含有熟地等含糖量高的药材有关。
3.4 四君子汤中游离氨基酸的定量分析^[6]
龚氏等对四君子汤中游离氨基酸进行了研究,同时对剂量不一的原方和新版教材方中的氨基酸进行了比较研究。
四君子汤:人参、茯苓、白术、甘草各6 g;新四君子汤:人参10g,茯苓9g,白术6g,甘草6g(全国高等医药院校教材《方剂学》第5版),分别按上述剂量称取药物组成各方,并置于250 ml的圆底烧瓶中,分别加入160 ml的70%乙醇回流提取1.5 h,滤取醇提液,药渣按上法继续回流提取,共计3次,合并3次醇提液,减压回收乙醇至无醇味,浓缩,于100 ml和250 ml容量瓶内定容,冷藏作供试液。
取供试液分别稀释至5倍,然后取50μl试液用氨基酸分析仪进行测定,其结果见表12-3-9。

表12-3-9 四君子汤中氨基酸分析结果(μg/g)

从表12-3-9中可以看出四君子汤中含有丰富的氨基酸。
3.5 四君子汤中微量元素的定量分析^[7]
取称10g单味中药置瓷坩埚中,加250ml去离子水浸泡,0.5h后分别置于控温电热板上煮沸,调节电热板温度保持微沸状态0.5h,趁热滤进250ml容量瓶,配到刻度。第2煎将各药再加250ml去离子水加热至沸,保持微沸状态0.5h,滤进250ml容量瓶,配到刻度。按四君子汤剂量配方,在方剂中加去离子水500ml,重复上述过程,最后配到500ml的容量瓶中。第2次煎液重复上述过程。铁、锰、锌、铜、用火焰法测定。钴、铬、用石墨炉法测定,其结果见表12-3-10。

表12-3-10 四君子汤及组方药物首煎、二煎微量元素测定

注:单味中药的数据表示每克中药中所含元素的量μg/g;方剂中药的数据表示整个方剂中元素总的含量μg
从表12-3-10中可以看出,方剂中的每一元素含量绝不是各单味中药各元素含量的简单相加。并且首煎液的元素含量显著优于2煎液中的含量。从测定结果看,四君子汤中铁、锰、锌、铜的含量较高,而这些元素对人体的生长发育,核酸及蛋白质的合成,生殖器的发育,第二性征的出现,血液代谢及内分泌调节,提高机体免疫及抗感染方面均有着至关重要的作用。同时,这些机体必需元素对维持中枢神经系统的构造及生理功能具有重要意义。
龚氏等为进一步用现代科学揭示补益方的实质,就《太平惠民和剂局方》和《正体类要》上的四君子汤、四物汤和八珍汤作了微量元素测定。结果表明:3个方中均含较为丰富的微量元素,其中以Fe、Zn、Mn等含量为高;3方比较除Fe(可能还有Ni、Co等外),均以四君子汤中微量元素含量为高,八珍汤次之,四物汤为低。补血方剂四物汤中含铁量高。与现代医学用铁剂治疗贫血的理论相一致。四物汤补血调经的功效,不仅是微量元素Fe的作用,而是多种成分共同作用的结果。Cu、Zn等元素在四君子汤中含量较高,从3个方Cu/Zn比值来看,似乎可以纠正患者血清Cu/Zn比值升高现象。并认为,从微量元素的生物学作用探讨气能生血理论是很有意义的^[8]。
李氏也对四物汤、四君子汤中微量元素的作用进行了分析研究^[9]。另有从补气、补血、气血双补代表方即四君子汤、四物汤、八珍汤中磷脂和维生素含量的分析测定探讨了各方的作用机制[10]。何氏对四君子汤的生物活性与化学成分上进行分析探讨[11]。
【药理研究】
1.对胃肠道运动的调节作用
人参、白术、茯苓、炙甘草各等份,以生药:水=1:3的比例加蒸馏水浸泡10h,然后加热浓缩过滤成100%的药液。取体重200～250g大鼠,雌雄兼用。实验前将大鼠禁食18～24h,自由饮水。实验时用新配制的含活性碳和阿拉伯胶各10%的蒸馏水混悬液(给四君子汤的运动则用四君子汤作溶剂来配制),按1mg/100g体重的用量灌胃。灌胃后15min断头剖腹,取出小肠铺平,测量碳粉混悬液从幽门括约肌推向小肠末端回盲部的距离,并计算这一距离占小肠全长的百分数作为胃肠推进运动的指标。整个过程均采取双盲法(即操作者不了解实验运动的分组情况),实验数据经t值法作统计处理^[12]。
1.1 对正常大鼠胃肠推进运动的影响
取大鼠24只,随机分为对照组和四君子汤组各12只。四君子汤组大鼠灌胃四君子汤4ml/kg,每日早晚各1次,连续3d,饮水吃料照常。对照组灌胃等量生理盐水,二组均于第4天进行实验。结果:对照组大鼠胃肠推进值为47.69±4.63%,四君子汤组为41.55±6.21%,比对照组降低6.14%,差异显著(P<0.05)。说明四君子汤对大鼠胃肠推进有抑制作用^[12]。
张氏用党参方的四君子汤及其组成药物白术、茯苓、甘草煎剂灌胃(25g/kg),对小鼠小肠炭末推进无明显影响,但党参在6.26～25g/kg剂量有明显抑制作用,同一剂量的四君子汤、党参、茯苓可拮抗新斯的明引起小鼠小肠炭末推进的亢进,白术、甘草则无明显的作用^[13]。
彭氏用中性红移动率观察了四君子汤对正常小鼠胃肠推进运动的影响,取ICR小鼠30只,随机分3组,常法观察胃肠道蠕动结果。空白对照组中性红移动率为49.3±10.0%,5或20g/kg四君子汤分别为52.6±5.1%及52.5±6.4%,表明四君子汤对正常小鼠胃肠运动无明显作用^[14]。
1.2 对利血平处理后大鼠胃肠推进运动的影响^[12]
取大鼠24只,随机分为利血平组和四君子汤加利血平组各12只。两组大鼠均肌肉注射利血平1.0mg/kg,每日1次,连续3d。四君子汤加利血平组大鼠在肌肉注射利血平的同时,灌胃四君子汤4ml/kg×2次/d×3d,利血平组灌胃等量生理盐水。结果:利血平组大鼠胃肠推进值为71.28±4.38%,四君子汤加利血平组为58.12±7.51%,比利血平组降低13.16%,差异非常显著(P<0.01)。
1.3 对肌注新斯的明后大鼠胃肠推进运动的影响^[12]
取大鼠24只,随机分为新斯的明组与四君子汤加新斯的明组各12只。四君子汤加新斯的明组大鼠灌胃四君子汤,方法同前。新斯的明组大鼠灌胃等量生盐水。两组大鼠均在实验时肌肉注射甲基硫酸新斯的明0.1mg/kg,15min后,灌胃碳粉混悬液。结果,新斯的明组大鼠胃肠推进值为65.50±5.39%,四君子汤加新斯的明组为54.49±7.44%,比新斯的明组降低11.01%,差异非常显著(P<0.01)。
1.4 对肌注阿托品后大鼠胃肠推进运动的影响^[12]
大鼠22只,随机分为阿托品和四君子汤加阿托品组各11只。四君子汤加阿托品组灌胃四君子汤,方法同前,阿托品组灌胃等量生理盐水。两组大鼠均在实验时肌肉注射硫酸阿托品0.1mg/kg,10min后,灌胃碳粉混悬液,结果:阿托品组大鼠胃扬推进值为24.26±6.02%,四君子汤加阿托品组大鼠胃肠推进值为22.91±7.09%,比阿托品组仅降低1.35%,无统计学意义(P>0.05)。
实验表明,该方对大鼠胃肠推进运动呈抑制性影响。并且,这种抑制作用在经利血平或新斯的明处理过的大鼠表现尤为明显。利血平能耗竭交感神经末梢中的肾上腺能递质,使之对胃肠的抑制作用降低,副交感神经相对偏亢;新斯的明是胆碱酯酶抑制剂,可以抑制组织中的乙酰胆碱酯酶,使乙酰胆碱破坏减少,在局部蓄积增多。因此,用利血平或新斯的明处理过的动物的消化道主要是处于胆碱能神经的优势支配之下。用四君子汤后,这两种方法处理过的大鼠异常增加的胃肠推进运动均受到抑制,说明该方主要是通过对抗胆碱能神经的兴奋作用而产生效应的。阿托品是M型胆碱能受体阻断剂,可以阻断乙酰胆碱的M样作用。用阿托品后,四君子汤对大鼠胃肠推进的抑制作用便减弱,其机制可能是由于阿托品阻断了乙酰胆碱的作用后,四君子汤无法通过胆碱能神经起作用的缘故。综上所述,四君子汤对胃肠推进运动主要呈抑制性影响。并且,推测这种影响是通过拮抗胆碱能神经递质的兴奋性作用而产生的。黄氏等认为消化道的神经支配十分复杂,除胆碱能神经外,还有肾上腺能、肽能及嘌呤能神经等,四君子汤对消化功能的影响也十分广泛,不会仅通过影响胆碱能神经这一条途径起到健脾的作用。
1.5 对食醋法脾虚模型小肠推进运动的影响^[14]
ICR小鼠45只,雌雄均有,随机分成5组,采用食醋法造模,并测量胃肠推进运动功能。结果四君子汤能消除小鼠脾虚症状,促进脾虚小鼠胃肠蠕动,详见表12-3-11。

表12-3-11 四君子汤对脾虚小鼠胃肠推进运动的影响(x±s)

与空白对照组比较:* * P<0.01;与脾虚模型组、自然恢复组比较△P<0.05,△△P<0.01
四君子汤对胃肠运动的作用,报道颇不一致,胡氏等^[15,16]认为四君子汤可抑制胃肠运动,使食物在肠道停留时间延长,利于食物的消化吸收。闻氏等[17]报道,四君子汤能促进大黄脾虚小鼠胃肠运动。彭氏等[14]实验结果表明,四君子汤对正常小鼠胃肠运动影响不大,但能明显提高食醋脾虚小鼠胃肠蠕动。结合胃肠运动生理功能及文献报道,认为,胃肠运动过快过慢均不利于食物的消化吸收,胃肠运动过快,食物在肠道停留时间过短,不利于消化吸收;胃肠运动过慢,缺乏动力,不仅不利于食物的运送、研磨,而且不利于食物与消化液的混合、肠壁的接触,从而影响消化吸收;脾虚动物胃肠运动缺乏动力,胃肠蠕动减弱,加之消化酶活性减弱,小肠吸收功能下降,故而出现腹泻;四君子汤对两种胃肠运动异常具双向调节作用,既能抑制乙酰胆碱、利血平、新斯的明等引起的胃肠运动异常兴奋,又能改善脾虚动物胃肠运动障碍。
2.四君子汤对动物消化液、消化酶的影响
2.1 四君子汤对小鼠胃液、胃酸、胃蛋白酶活性的影响^[14]
取ICR小鼠27只,雌雄均有,随机分为空白对照组及四君子汤高低剂量组,分别灌胃生理盐水5ml/kg、四君子汤药液5ml/kg或20ml/kg,连续2d,禁食2h,第3d腹腔注射1%戊巴比妥钠5ml/kg麻醉,常规消毒皮肤,于剑突下沿腹白线开一约长0.8cm的切口,轻轻找出胃,在幽门与十二指肠结合部用缝线结扎,小心避开血管,缝合腹壁切口。4h后处死动物,拆线,开腹,结扎贲门,取出胃,沿胃大弯切开胃,收集胃液于刻度管中,3000r/min离心10min,计算胃液量,用精密pH试纸测定胃酸pH值。采用Mett氏法改进测胃蛋白酶活性。结果,四君子汤对小鼠胃液量、胃酸pH值无明显影响,但能提高胃蛋白酶的活性,详见表12-3-12。

表12-3-12 四君子汤对小鼠胃液、胃酸、胃蛋白酶活性的影响(x±s)

注:与对照组比较:* * P<0.01,胃蛋白酶活性为24h消化1mm毛细玻璃管内凝固鸡卵蛋白的长度
2.2 四君子汤对脾虚大鼠胃主细胞内酶元颗粒的影响^[14]
取SD大鼠50只,雌雄均有,随机分为5组。食醋法造模10d后用四君子汤药液灌胃治疗,分别为3.5ml/kg·d-1、7ml/kg·d-1,连续5d。第16d,在乙醚麻醉下活体取胃组织1块,立即投入3%戊二醛液内固定,常规电镜制片,H-600型透射电镜观察。结果与正常组动物相比,脾虚模型大鼠脾虚症状明显,胃主细胞内酶元颗粒明显减少;自然恢复组大鼠脾虚症状仍见,胃主细胞内酶元颗粒有所增加;经四君子汤治疗后,脾虚症状消失,3.5g/kg组胃主细胞内酶元颗粒明显增加,7g/kg组胃主细胞内酶元颗粒非常丰富。
胃蛋白酶原由胃主细胞合成,并以酶元颗粒的形式贮存在细胞内,无活性的胃蛋白酶原分泌入胃后,与盐酸接触转变成有活性的胃蛋白酶。胃液中胃蛋白酶的活性能代表胃液的消化力。四君子汤对胃液量、胃酸pH值无影响,但能明显增加胃主细胞内酶元颗粒的含量,提高胃蛋白酶消化毛细玻璃管内凝固蛋白的长度;提示四君子汤能促进胃蛋白酶原的合成,提高胃蛋白酶的活性,从而提高消化能力。
3.四君子汤对动物小肠吸收功能的影响
3.1 四君子汤对脾虚大鼠血清D-木糖含量的影响^[14]
取SD大鼠45只,雌雄均有,随机分为5组,方法同前,第16d,灌胃10%D-木糖10ml/kg,1h后股静脉采血,静置,离心,分离血清,用半自动生化光谱分光分析仪,对溴苯胺比色法测血清D-木糖含量。结果,四君子汤能消除大鼠脾虚症状,明显升高脾虚大鼠血清D-木糖的含量。正常对照组为0.33±0.08mg/ml,脾虚组为0.29±0.07mg/ml(P<0.05),自然恢复组为0.35±0.10mg/ml,3.5g/(kg·d)及7.0g/(kg·d)四君子汤组分别为0.39±0.12mg/ml,0.41±0.14mg/ml,与脾虚组相比P值均<0.05。
3.2 四君子汤对脾虚大鼠小肠上皮细胞微绒毛的影响
方法同前。第16d,在乙醚浅麻下取空肠组织1块,立即投入3%的戊二醛液内固定,常规电镜制片,H-600型透射电镜下观察空肠吸收上皮细胞微绒毛的形态。结果,空白对照组大鼠空肠吸收上皮细胞微绒毛排列整齐;脾虚模型组大鼠空肠吸收上皮细胞微绒毛肿胀、脱落、数量减少、排列紊乱、表面糖衣减少;自然恢复组大鼠空肠吸收上皮细胞微绒毛仍短、稀疏、脱落、肿胀、排列紊乱;四君子汤小剂量组大鼠空肠吸收上皮细胞微绒毛排列整齐、糖衣丰富;四君子汤大剂量组大鼠空肠吸收上皮细胞微绒毛密集,排列整齐,糖衣丰富。
小肠是吸收营养物质的主要场所,小肠吸收上皮细胞微绒毛能增加肠道与食物的接触面积,利于营养物质的吸收。D-木糖已作为比较公认的脾虚特异性指标,四君子汤能升高脾虚大鼠血清D-木糖,增加脾虚大鼠小肠上皮细胞微绒毛,从而增强小肠对营养物质的吸收功能。
4.调整小鼠消化功能紊乱的作用^[18]
选用NIH种雄性小鼠,体重20～25g,鼠龄4周。将小鼠随机分为4组。对照组:常规饲养,以等体积生理盐水代替药物。小承气汤组:每日上午、下午各灌饲小承气汤煎剂1次,每次72g/kg(0.6ml/20g体重),半量进食,自由饮水。小剂量四君子汤组:灌饲小承气汤,剂量和次数与小承气汤组相同,并于上午灌饲小承气汤前1～2h灌饲四君子汤煎剂,11g/kg体重,半量进食,自由饮水。大剂量四君子汤组:动物饲药方法与小剂量组相同,但四君子汤剂量加倍,22g/kg体重。连续给药(或生理盐水)14d后,分别测定小鼠5min自主和站立活动次数,处死前禁食24h,称体重,各组小鼠均灌饲25g/L的葡萄糖溶液(约0.2ml/10g体重),30min后,自眼眶取血,用葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度。
颈椎脱臼处死动物后,迅速取出适当肝脏洗净残血,置入预冷的线粒体分离介质中(HEPES缓冲液),用聚四氟乙烯浆器研磨成肝匀浆,按常规方法分离线粒体,Lowry法测定线粒体蛋白质含量,以谷氨酸-苹果酸为底物,用Clark氧电极测定线粒体耗氧量。测氧系统,加200μl新鲜鼠肝线粒体(约5mg蛋白/ml)至反应介质液中,总体积2ml。30℃保温3min后,开始记录耗氧量,加500μmolADP(5μl)至反应体系中,此时耗氧速度明显增加,为呼吸状态3(S3)。当ADP磷酸化形成ATP时,抑制呼吸,耗氧速度降低,称为呼吸态4(S4)。呼吸控制比率是S3/S4比值,以此值表示氧化磷酸化反应效率。
取上述各组小鼠肝脏(约0.25g)用预冷的生理盐水洗净表面残血,制备10%肝匀浆,分别吸取1ml匀浆液,各加入1ml 3% HClO4沉淀蛋白,离心3000r/min 10min,取上清液1ml,加入80μl20%KOH,中和至pH7.0左右,置4℃冰箱内30min,使KClO4析出结晶,取上清液10μl用高效液相色谱仪直接测定三种腺苷酸(AMP、ADP、ATP)含量,按下列公式分别计算各组肝细胞能荷值。

4.1 四君子汤对小鼠糖吸收和体重的影响^[18]
各组空腹小鼠口服葡萄糖后,四君子汤组小鼠血糖明显高于小承气汤组(P<0.01),但未见剂量依赖关系,证明四君子汤具有促进糖吸收作用。同时该两组小鼠的体重也明显高于小承气汤组(P<0.01)。小承气汤组小鼠血糖和体重都显著低于对照组(P<0.01)。

表12-3-13 四君子汤对小鼠糖吸收和体重的影响(x±s)

注:与对照组比较,* * P<0.01;与小承气汤组比较,△△P<0.001
4.2 四君子汤对小鼠自主活动与站立能力的影响^[18]
四君子汤组小鼠5min自主活动和站立能力均强于小承气汤组,并接近对照组,大剂量四君子汤组优于小剂量四君子汤组,表明四君子汤组通过纠正小承气汤所致的胃肠功能紊乱,促进糖吸收,提供机体自主活动的物质基础(能源)。

表12-3-14 四君子汤对小鼠自主活动和站立能力的影响(次/5min,x±s)

注:与对照组比较,* * P<0.01;与小承气汤组比较,△△P<0.01
4.3 四君子汤对小鼠肝脏线粒体氧化磷酸化反应的影响[18]
小承气汤组RCR值显著低于对照组(P<0.01)和小剂量四君子汤组、大剂量四君子汤组(P均<0.01),而后者又接近对照组;说明小承气汤引起小鼠肝脏线粒体RCR值降低,是与胃肠吸收功能下降有关,四君子汤则有保护肝线粒体合成ATP的功能,并呈最效关系,结果见表12-3-15。

表12-3-15 四君子汤小鼠肝线粒体氧化磷酸化效率的影响(±s)

注:与对照组比较,* * P<0.01;与小承气汤组比较,△△P<0.01
4.4 四君子汤对小鼠肝细胞能荷的影响^[18]
小承气汤组能荷值低于其他3组,说明小承气汤模型组小鼠ATP水平的调节受到影响,大剂量四君子汤组可明显地调整能荷值,并近于对照组,结果见表12-3-16。

表12-3-16 四君子汤对小鼠肝线粒体能荷的影响(±s)

实验结果说明,四君子汤组小鼠对糖的吸收功能有明显改善,体重增加和自主活动能力增强等,这可缓解气血生成不足所引起的气虚现象。肝脏能量代谢实验包括两项内容:能量(ATP)的生成和能量的调节。四君子汤组小鼠肝线粒体RCR明显高于小承气汤组,尤以大剂量组更为显著。因为小承气汤有耗气破气,损伤胃肠正常功能的作用,加之饥饱失常,两者互为影响,而导致肝脏氧化磷酸化效率降低。RCR是反映线粒体氧化磷酸化功能主要指标:RCR值大,说明偶联能量效率高,能量(ATP)合成增加;反之,偶联效率低,即解偶联占优势,能量合成减少。正常情况下,机体以偶联和解偶联方式不间断地调整着能量动态平衡和温煦四肢维持体温的作用。实验结果说明四君子汤具有调整肝脏线粒体合成能量功能或参与治疗脾气虚证的作用。
细胞能荷值是机体组织细胞能量状态的一种参数。正常机体细胞能荷值在0.80～0.95较窄范围内波动,它受生理或病理等多种因素的调节。实验中观察到小承气汤组动物肝细胞能荷值均低于其他3组,说明四君子汤可改善消化功能低下所引起的细胞能荷的平衡失调,这有利于组织细胞代偿性的调节能量转换,以应激维持细胞的正常生理功能。
5.对胃粘膜细胞形态学、酶组织化学和胃肠激素的影响
按常规煎煮法制备四君子汤、大承气汤煎剂(四君子汤和大承气汤分别含生药量约为100g/L、300 g/L浓缩药液),存于0～4℃备用。将48只雄性大鼠随机分为4组,每组12只。对照组:常规饲养,用等量生理盐水代替大承气汤和四君子汤煎剂。模型组:每日上午(10:00)灌饲大承气汤煎剂50g/kg体重(20 ml/kg体重),半量进食,随意饮水。小剂量四君子汤组:每日上午先灌喂四君子汤煎剂10 g/kg体重,1～2 h后,灌喂大承汤煎剂(剂量同模型组)。大剂量四君子汤组:塑模方法同小剂量四君子汤组,仅四君子汤剂量加倍。各组大鼠连续给药(或生理盐水)15d,处死动物前禁食24 h。脱臼处死大鼠后,参照Lewin方法分离胃粘膜细胞,用pH5.5的柠檬酸缓冲液洗涤,收集分离的混合胃粘膜细胞,制备成悬浮细胞液,涂于玻璃片上,供细胞形态学观察。用Harris法HE染色显示细胞一般形态。以Hanslem法显示碳酸酐酶(CA); Nacheas的N-BT法显示琥珀酸脱氢酶(SDH); Wachstein和Meisel铅法显示三磷酸腺苷酶(ATPase)和葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)。每组分离的壁细胞计数200个,依据染色反应深浅(表示酶活性强度)分为3级:以正常细胞染色深度为+ +,浅色为+,阴性为-,作分类构成比进行统计学分析。自眼眶取血,肝素抗凝,离心3000 r/ min, 10 min,分离血浆,应用放射免疫分析药盒分别测定胃泌素、胃动素、胰高血糖素3种胃肠激素^[19]。
5.1 对胃粘膜细胞等形态学的影响
易氏[19]分离的胃粘膜细胞包括胃粘膜表面上皮细胞(柱状细胞)和胃底腺上皮细胞(壁细胞、主细胞、颈粘液细胞),经计算1 000个细胞获得它们的平均百分比是:柱状细胞为1.7,腺上皮细胞分别为38.1、55.2和5.0。大承气汤诱发的脾虚模型能见到胃粘膜一些细胞的损伤,尤对壁细胞更为明显,如细胞皱缩、胞膜出现局部缺损和胞质嗜酸性较对照组降低,由红色转为浅暗红色,严重损伤的壁细胞显出空泡化、核浓密。四君子汤组动物显示壁细胞损伤程度较轻,细胞增大,胞质嗜酸性强。
陈氏^[20]用应激过量和饥饱法经过较长时间造成大鼠脾虚证模型。观察到脾虚大鼠的胃、肠、胸腺、脾脏、肝脏、肾上腺、心脏、卵巢等均发生明显的组织学改变;心、肠、胸腺等的超微结构也发生显著变化。这些器官的病理改变是临床上脾虚证患者出现纳差、腹胀、便溏或腹泻、免疫功能降低及血液系统改变,神经内分泌紊乱的病理基础。以本药加黄芪、陈皮组成加味四君子汤,可促进脾虚大鼠体重、胸腺重、脾脏重、胸腺皮质厚度,空肠腺上皮细胞核分裂数的增加(P<0.01),可促进胸腺、脾脏、胃、肠、心脏等超微结构恢复正常。说明加味四君子汤对脾虚动物胃肠粘膜修复、胸腺及脾脏淋巴细胞数增加有益,也表明对上述器官的线粒体等细胞器的复制有促进作用^[25]。
彭氏^[21]实验也证明四君子汤有抗脾虚动物胃肠细胞损伤的作用,对过劳和饮食失节造成大鼠脾虚模型,用四君子汤灌胃给药,电镜观察发现给药组胃肠粘膜的修复比自然恢复的好^[22]。
曹氏^[23]证明四君子颗粒能改善脾虚症状,纠正胃肠病损,消除细胞变性,坏死脱落的病理变化,恢复细胞、亚细胞、细胞连接的形态,增加细胞表面微绒毛、细胞质颗粒和细胞器的数量。提示四君子颗粒具有胃肠细胞保护及抗脾虚动物胃肠细胞损伤的作用。
5.2 对酶组织化学的影响^[19]
壁细胞酶的组化染色反应明显,易于观察,进行计数比较,经构成比的统计学处理,显示四君子汤可以使大承气汤引起CA和SDH降低的酶活性增强,见表12-3-17,表12-3-18,有统计学意义。虽然ATPase和G-6-Pase活性无明显差异,但ATPase活性有增高的趋势。

表12-3-17 四君子汤对壁细胞显示CA染色反应构成比的影响

注:*小剂量与大剂量四君子汤组差异不显著,结果未列入

表12-3-18 四君子汤对壁细胞显示SDH染色反应构成比的影响

5.3 对3种胃肠激素含量的影响[19]
结果见表12-3-19。

表12-3-19 四君子汤对3种胃肠激素含量的影响(ng/L)

注:与对照组比,* P<0.05,* * P<0.01;与大剂量四君子汤组比# P<0.05
由表12-3-19所示,模型组和小剂量四君子汤组动物胃泌素均低于对照组(P<0.01),但两种剂量的四君子汤组均高于模型组,尤其大剂量四君子汤组与对照组接近。模型组的胃动素和胰高血糖素均高于对照组(P<0.01,P<0.05)和大剂量四子君汤组(P<0.05),大剂量四君子汤组亦优于小剂量四君子汤组并接近对照组。
实验结果发现模型组大鼠胃粘膜细胞形态受损,尤以壁细胞明显,同时其CA、SDH和ATPase活性降低,胃泌素亦降低,但胃动素和胰高血糖素则有增加趋势,四君子汤组动物上述各项指标均有明显改善并接近对照组。
模型组动物由于苦寒泻下的大承气汤加以饥饱失常,诱导胃肠功能紊乱,生物膜流动性降低,CA和SDH活性下降,伴随胃酸分泌减少,减弱对食物的消化作用。脾虚证时,由于脾失健运所致的消化系统以及机体整体功能紊乱,因而出现神疲、乏力、倦怠、便溏以及胃粘细胞形态损伤、酶活性低下及某些相关的胃肠激素分泌失调等症,而四君子汤能在一定程度上阻抑大承气汤对机体的损伤作用及过度的胃肠蠕动,保护胃粘膜细胞,有利于对营养物质的吸收,此可能与白术、茯苓直接松弛平滑肌,使收缩幅度减少,张力下降或降低胃动素分泌有关。结果提示,四君子汤剂进入胃部组织已开始发挥药物作用,可能通过保护胃粘膜细胞,调整紊乱的胃肠激素,促进胃肠道对葡萄糖的吸收,继之提供肝脏代谢功能的物质基础,从而发挥对机体的整体补益效应。
6.对胃肠激素和代谢的影响
任氏从分子生物学角度探讨四君子汤健脾的机制。用利血平造成脾虚证大鼠模型,用放射免疫分析(RIA)测定发现其血浆和近段空肠组织胃动素(MOT)的含量明显下降,降结肠和直肠组织前列腺素E2(FPE2)的含量明显升高。MOT的主要功能是影响胃肠道的运动功能。在消化间期MOT呈周期性释放;引起胃和小肠产生IMCⅢ相,并诱发胃强烈收缩和小肠明显的分节运动,其生理意义,可能是对胃肠腔的内容物起着一种清扫作用。PGE2对肠道平滑肌有很强的收缩作用,可使肠蠕动加快,并能抑制肠腔中水和电解质的吸收,刺激肠液分泌。脾虚患者的纳差、腹胀及消化不良与患者上段小肠的MOT水平下降有关;而腹泻、肠鸣与大肠中PGE2的水平升高有关。四君子汤每日4g/只,连续灌胃14d可明显提高模型大鼠的血浆和上段小肠MOT含量,降低其大肠中PGE2的含量,提示四君子汤的益气健脾作用与其调整胃肠激素失衡有关^[24]。
郭氏用大鼠70只,复制大鼠烫伤模型,随机分为3组,烫伤治疗组于伤后12h开始管饲四君子汤加味,烫伤对照组和假伤组管饲蒸馏水。结果,四君子汤可明显降低烫伤大鼠血浆和肠粘膜TNT、NO和MDA含量。表明四君子汤对减轻烫伤后肠粘膜的损伤应有积极的作用^[25]。
宋氏^[26]研究了不同时辰四君子汤治疗“脾虚证”大鼠血清胃泌素昼夜节律性的变化规律。
7.对肠菌失调胃肠功能的影响^[27]
四君子汤由党参、白术、茯苓、甘草等组成,3次煎液混合浓缩至含生药100%的药液,实验时用蒸馏水配成所需浓度;大黄3次煎液混合浓缩至含生药100%药液。
7.1 对肠道菌群紊乱的治疗作用
小鼠64只,其中48只每日灌胃大黄药液1g/只,所余16只同时每日灌胃等容量蒸馏水,均连续给药8d,此后,将灌大黄小鼠随机分为四君子汤高剂量组(20g/kg·d),低剂量组(5g/kg·d)、模型对照(等容量蒸馏水),将灌蒸馏水小鼠作正常对照组(等容量蒸馏水)。随即,各组动物每日灌胃给予相应药物或蒸馏水1次,连续5d,无菌条件下剖开腹腔,采集肠道内成型粪便。用双歧杆菌和乳酸杆菌液培养基分别将粪便稀释成10-7浓度,各取0.1ml分别接种于双歧杆菌和乳酸杆菌固体培养基上,厌氧条件下37℃培养72h,记数双歧杆菌和乳酸杆菌菌落数。实验数据采用t检验处理。结果模型对照组双歧杆菌(×107/g粪便),乳酸杆菌(×107/g粪便)4.44±2.42、6.07±1.00,正常对照组为14.56±2.45和29.69±10.28,四君子汤剂量组为7.44±2.42(P<0.01),13.69±3.80(P<0.001),低剂量组分别为6.75±2.77(P<0.05),10.50±3.32(P<0.01)。
7.2 对肠道菌群紊乱的预防作用
小鼠64只,组别、药物、给药量及给药途径同上,除正常对照组每日灌胃给予等容量蒸馏水外,其余3组运动每日灌胃大黄药液1g/只,均连续8d。在此期间,从第4d开始,各组动物均同时加用相应药物或蒸馏水等至第9d。停药日处死动物,照前述方法取小鼠粪便、培养和记数。结果模型对照组双歧杆菌(×107/g粪便),乳酸杆菌(×107/g粪便),分别为1.00±0.78、4.79±2.90,正常对照组12.75±2.59、26.81±5.88;四君子汤高剂量组为2.36±0.84、14.24±1.53,低剂量组分别为2.28±0.48、16.62±5.30,给药组与模型组比较P均小于0.01。
双歧杆菌和乳酸杆菌系肠道内的优势菌群,其对维护机体的健康具有重要的意义。小鼠灌胃给予大剂量的大黄水煎液制造动脾虚模型,可引起肠道菌群紊乱,其中双歧杆菌和乳酸杆菌菌量明显减少。四君子汤为中医治疗脾虚的经典方药,脾虚模型小鼠用药后,对双歧杆菌和乳酸杆菌具有明显的增菌作用,从而调节肠道菌群失调,此作用可能系其临床治愈脾虚的药理作用基础之一。
另有多篇报道,进行了加四君子汤对类脾虚小鼠的作用研究^[28]、四君子汤单味药对动物离体小肠运动的响^[29]、四君子汤与红芪建中汤对大黄合剂复制小鼠,“脾虚”模型的作用对比^[30]、以及用四君子为基础加味组方制成健儿散后和四君子汤对正常或大黄致脾虚动物体重的对比研究[31]。
8.对离体平滑肌运动的影响
本药对动物离体肠管运动具有明显的抑制作用。实验表明,用药后正常家兔离体十二指肠紧张性下降,收缩幅度减小;对Ach-氯化钡引起的家兔离体回肠强直性收缩有抑制作用,对前者的抑制较后者强,其抑制率分别为83%和26%;在离体豚鼠回肠上,对氯化钡、组胺的抑制率分别为27%和65%;对于肾上腺素所致的家兔十二指肠和豚鼠回肠收缩抑制,本药反而使收缩振幅度加大。上述结果表明本药对肠道运动的影响主要与其Ach及组胺有关,对平滑肌的直接作用较弱。还可看出,本方还能调整病理状态下肠管运动功能,使亢进者抑制,抑制者兴奋,呈现双向调整作用。朱氏亦对家兔离体小肠进行实验观察,结果表明本方可使正常小肠张力降低,但振幅增加;对Ach引起强直性收缩的抑制率为87%,但对抗肾上腺素的作用效果不明显。白术亦能对抗Ach及肾上腺素的作用[32]。离体平滑肌试验表明,该方煎剂对家兔十二指肠自发活动呈抑制性影响,可拮抗乙酰胆碱引起离体小肠的强直性收缩,对氯化钡的拮抗作用较弱,但抗组胺作用显著,也能部分解除肾上腺素所致肠管的抑制^[33]。本方还能降低利血平化小鼠回肠对乙酰胆碱的异常反应性,使其恢复至正常水平^[34]。本药的不同提取物对家兔离体肠管收缩运动的作用趋势是一致的,即表现为抑制离体小肠的自发收缩运动,拮抗Ach或氯化钡所致的肠管强直性收缩。但其各个不同提取部位的药理作用强度有所不同,以醇提取为最佳。以乙醇或水提取后,再经正丁醇萃取,萃取液的药理作用较强,认为其药理活性成分为中等极性物质;而各不同提取部位的物质,均未发现有拮抗肾上腺素所致离体肠管的抑制作用。实验表明,本药乙醇提取正丁醇萃取物,基本上能代表本药对离体肠管收缩运动的作用[15]。四君子汤也可抑制由钡离子所引起的肠管运动,但对抗氯化钡的作用较弱,亦即直接作用于平滑肌的作用较弱。同时发现,四君子汤抗组胺的作用较强,100%四君子汤1.0ml对组织胺的抑制百分率为65%(P<0.05)。结合临床,一部分慢性过敏性腹痛腹泻患者,服用本方可通过抗组胺而发挥疗效^[32]。
9.对胃肠肌电的影响
9.1 对利血平脾虚模型在体胃肠肌电的抑制作用^[35]
选择体重250～400g健康豚鼠,雌雄不限,随机分为脾虚组、对照组、治疗组和自然恢复组,每组10只动物。对每组动物观察用药前后体重、症状、体征和在体胃肠肌电的变化。脾虚组和对照组分别经腹腔注入利血平注射液(0.4ml/kg体重/d)和蒸馏水(0.4ml/kg体重/d)。连续注射4d。第5d记录。记录前,禁食18～24h,用20%乌拉坦(7ml/kg体重),腹腔注入麻醉后,开腹详细观察各段肠管充盈状态、颜色及运动情况。同时描记胃、回肠、结肠和盲肠的肌电活动。纸速2.5～5mm/s,时间常数胃为2s,其他部分均为0.1s,滤波15Hz。腹腔胃肠均浸没在温台氏液中,动物体温维持在37℃左右。治疗组和自然恢复组:两组动物在连续4d注射利血平后,分别经胃灌入100%四君子汤煎剂和自来水,各5ml,每日2次,连续7d,用上述方法,观察体重、症状及描记胃肠四个不同部位的肌电变化。
全身症状和体征:脾虚组动物在注射利血平第2 d后,即出现饮食下降、逐渐消瘦,先后出出软便,个别出现水样便。活动减少,反应变钝,全身发抖、畏寒,个别动物出现震颤、眯眼、嘶叫声变低,四肢及腹部肌力减弱,腹部仰卧外观呈现舟状腹。剖腹安放吸引电极前,首先可见各段肠管蠕动明显加快,继而逐渐减慢。胃、空肠、结肠、盲肠内容物缺失,各肠段失去了肠内容及粪便充盈时的自然分界的颜色,表现均匀一致的粉红色。对照组在注射等量的蒸馏水后,饮食正常,成形粪便,行走迅速,反应灵敏,睑裂正常,嘶叫声尖调高,腹肌和四肢肌肉挣扎时有力,剖腹时可见各段肠管运动缓慢,各段均被肠内容或粪便充盈,呈现自然可辨的颜色:十二指肠、空肠为粉红色,回肠、结肠为灰褐色、盲肠为蓝黑色。
体重变化:脾虚组动物注射利血平后,体重出现逐日明显下降(P<0.01),对照组注射前后体重没有明显变化(P>0.05)。治疗组和自然恢复组在治疗期间体重略有增加,但无统计学意义(P>0.05)。
在体胃肠肌电的变化:由正常的豚鼠胃肠道平滑肌一般可记录到两种型式的肌电活动,一种为基本电节律,又称慢波;另一种是负载在慢波之上频率较快的锋电活动,又称快波。用本方法,在胃部只记录到慢波,而在其他3个部分能观察到这两种型式的电活动。除在胃和结肠能记录到规律性的慢波外,在各段肠管都可记到不规律性的慢波和快波。
对慢波的作用:在脾虚组和对照组胃和结肠所记录到的规律性慢波的平均频率和振幅之间比较,没有明显差别。见表12-3-20。结果提示在脾虚组动物慢波变化不大。

表12-3-20 脾虚组和对照组豚鼠胃和结肠慢波的比较(±s)

对快波的作用:利血平致脾虚后豚鼠的快波变化较为明显,可使各段肠管快波出现率增加。在对照组动物的回肠、结肠、盲肠所记录的快波出现率较少,但在脾虚组则使快波出现率明显增高(P<0.01)。表12-3-21。

表12-3-21 对照组和脾虚组不同部位快波出现率的比较

此外,利血平对脾虚豚鼠的快波频率及振幅也有明显影响。在对照组快波的平均频率和平均振幅都较低,而脾虚组快波的平均频率及振幅均明显增加(P<0.01)。见表12-3-22。
四君子汤对动物体征及胃肠肌电的影响:治疗组与自然恢复组运动比较,脾虚诸证消失较快,如饮食增加,便型转为正常,活动增多,发抖减轻,肌力增加,嘶叫声变为有力,体重开始回升,剖腹时可见各段肠管蠕动减慢,肠腔充盈,各段颜色分明。其中胃肠的肌电首先恢复,而体重和肌力恢复最慢。用四君子汤对脾虚后的豚鼠进行治疗,结果发现四君子汤可使致虚后的动物回肠、结肠增加的快波出现率显著下降(P<0.01),盲肠的快波出现率也出现减少(P<0.05)。四君子汤对脾虚后豚鼠的回肠、结肠的快波平均频率及平均振幅也有明显降低作用(P<0.05),对盲肠的频率和振幅作用不明显(P>0.05)。

表12-3-22 对照组和脾虚组不同部位快波的比较

9.2 对利血平脾虚模型小肠移行性肌电复合波(MMC)的影响
陈国志等以小肠移行性肌电复合波(MMC)为指标,观察脾虚大鼠运动变化及加味四君子汤对其作用的效应(加味四君子汤由四君子汤加黄芪、陈皮组成)。小肠MMC是指在清醒状态下禁食15～24h记录出的电活动,它由四个时相组成:Ⅰ时相指重迭快波的慢波数少于5%,与之对应的是小肠运动处于相对静止状态;Ⅱ时相指重迭快波的慢波数大于5%而小于95%,与之对应的小肠运动是不规则的收缩活动;Ⅲ时相指重迭快波的慢波数在95%～100%,此时相小肠运动为规则的节律性收缩;Ⅳ时相与Ⅱ时相相同,但正常大鼠小肠有时不出现Ⅳ时相。四个时相持续时间分别为3.0～4.0,3.0～6.0,2.5～4.0,0.5～1.0min,顺序发生,周而复始的规律出现。大鼠小肠MMC的周期一般在10～15min。利血平致脾虚大鼠的小肠MMC周期的Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ时相持续时间缩短或消失,Ⅱ时相及周期明显延长,表明小肠运动功能发生紊乱,可能与利血平增加小肠组织中Ach含量而导致植物神经功能紊乱有关,可能是脾虚动物便溏或腹泻的原因之一。加味四君子汤明显促进脾虚大鼠小肠MMC各时相周期恢复正常或接近正常,具有调节小肠运动功能紊乱的作用,此作用可能与调节植物神经功能有关。实验结果还表明加味四君子汤的作用效应以空肠最好,十二指肠次之,其原因有待进一步研究^[36]。
9.3 对辐照致脾虚模型小肠移行性肌电复合波的影响
在麻醉大鼠的十二指肠、空肠及回肠的肌层上各埋植一对铂金丝针状双电极,术后7d开始实验。首先记录正常大鼠小肠MMC,然后经60Coγ线1次全射照射8Gy(剂量率104.8伦/min)。照射后将动物随机分为治疗组(7只)与对照组(9只)。治疗组照射后即时、1、2、3d予加味四君子汤1.6g/kg灌胃,每天1次;对照组予等量蒸馏水灌胃。记录照射当天、1、3、5、7d的小肠MMC,每次记录前禁食16～24h,记录60min。时间常数0.01s,高频滤波10Hz。
加味四君子汤对8Gy照射大鼠小肠MMC的影响:结果见表12-2-23,表12-3-24,表12-3-25。与照射前比较,对照组大鼠在照射后前3d小肠呈兴奋状态,表现在:绝大多数动物的小肠MMC周期消失,以Ⅱ时相代之:个别出现MMC周期的大鼠也是Ⅱ时相明显缩短(P<0.05)、周期数增加;在某些大鼠的Ⅱ时相中有分节律出现。从第3d以后存活的大鼠MMC周期全部消失,仅有Ⅰ和Ⅱ时相,这时大部分动物出现严重的腹泻,发生率93%;治疗组大鼠在照射后前2d小肠亦呈兴奋状态,与对照组相似。但从第3d以后存活的部分大鼠仍然出现MMC周期,除十二指肠的Ⅱ时相与照前比较仍有差别(P<0.05)外,其他已基本正常。腹泻的大鼠明显减少,发生率60%。这表明加味四君子汤能促进缺乏MMC的小肠恢复正常,能调整小肠的运动功能[37,38]。

表12-3-23 加味四君子汤对8 Gy照射大鼠十二指肠MMC各时相及周期持续时间的影响(min,±s)

注:与本组照前比较,*P<0.05,**P<0.01;[]:出现MMC周期动物数;():出现次数

表12-3-24 加味四君子汤对8Gy照射大鼠空肠MMC各时相及周期持续时间的影响(min,±s)

注:与本组照前比较,*P<0.05,**P<0.01;[]:出现MMC周期动物数;():出现次数

表12-3-25 加味四君子汤对8Gy照射大鼠回肠MMC各时相及周期持续时间的影响(min,x±s)

注:与本组照前比较,* P<0.05,* * P<0.01;[]:出现MMC周期动物数;():出现次数
10.对营养代谢的影响
李氏^[39]观察了四君子汤、香砂六君子汤、古汉养生精、五氏培元固本丹四种方剂对能量生成的影响。以大鼠小肠葡萄糖转运电位(PD)的方法研究了四君子汤对小肠粘膜上皮细胞葡萄糖转运系统的影响,结果表明,以大黄致脾虚大鼠和以饥饿方法造成的气虚大鼠,其PD明显受到抑制,而四君子汤则有促进PD恢复的作用,揭示脾虚与气虚时上皮细胞Na+泵的转运受到阻抑,而四君子汤则有促进其恢复的作用^[40]。
实验也发现上述因素大鼠“脾气虚”的动物,其骨骼肌贮存能源物质减少,能量供应不足,线粒体及氧化酶异常减少以及无氧酵解酶活性异常升高的变化。而在造模的同时,每日口服四君子汤(5.75g)的大鼠,投药2周后可纠正上述变化。动物表现为进食量大、体重增长快。肌细胞化学成分也有所不同,表现四君子汤组其肌糖原含量的过碘酸-雪夫(PAS)染色反应的颜色较自然恢复组加深,尤其以Ⅰ型纤维明显,定量研究结果表明Ⅰ型和Ⅱ型的含量均较自然恢复组高;显示肌脂类的油红O染色,四君子汤组也较自然恢复组深,定量表明四君子汤组ⅡA和ⅡB型纤维的脂类含量明显增高,Ⅰ型纤维无明显差异:反映三羧酸循环情况的琥珀酸脱氢酶(SDH)硝基四氮法反应较自然恢复组强,Ⅱ型纤维尤为明显;作为反映细胞色素氢化酶(CCO)的偶联法反应与上述SDH变化结果相一致。四君子汤组的ATP含量较自然恢复组增高。超微结构和电镜组化观察表明,四君子汤组骨骼肌结构接近正常,结构异常的线粒体较少,线粒体的SDH反应较自然恢复组强^[41]。
本方煎剂可提高小鼠肝糖原的含量^[42]。实验表明限制饲料小鼠,其肝重、肝脏系数、肝脏RNA含量均较正常对照组明显下降,而加用四君子汤则有明显的改善^[43],四君子汤加黄芪煎剂能提高大黄“脾虚”动物模型肝脏合成RNA的能力^[44]。
阮氏对烧伤豚鼠早期代谢营养的观察,发现四君子汤能促进代谢有利于烧伤的愈后^[45]。
11.保肝作用
对肝脏的修复作用,由四君子汤加补骨脂、五味子、肉豆蔻等组成的益气健脾方,分别制成注射液和煎剂,按3g/100g体重给大鼠灌胃或皮下注射,对四氯化碳造成的慢性肝损伤有明显的保护作用,并能使坏死区较快得以修复。给药组的血清谷丙转氨酶(SALT)接近正常,较肝损病理组明显降低(P<0.01),肝糖原含量无明显减少。用体外试管法实验显示,本方对HBsAg有一定的抑制作用,其抑制滴度为1:2～1:512[46]。控制饲料对小鼠造成肝脏组织萎缩,即脾虚性肝损伤,然后喂饲四君子汤,与对照组比较,发现肝组织的重量明显增加,而核酸含量无明显变化。肝重增加可能是由于四君子汤促进了小鼠的肝糖原合成,而肝糖原的大量贮存增强了肝脏的解毒功能,并可防止或减轻肝细胞受损后发生的病理变化,有利于肝功能的恢复。当大鼠在跑步机上跑步造成过劳,并用猪油灌胃使其饮食失节时,肝脏的线粒体在超微结构上发生了一定的改变,表现为线粒体嵴的大部分或全部消失。给这种模型的大鼠服用四君子汤,可使线粒体嵴数增多,并且结构清晰,排列整齐,不给药待其自然恢复,则速度较慢[47]。说明四君子汤可促使受损肝脏线粒体的修复,使细胞的能量代谢趋于正常,这对肝病的治疗有重要意义。
12.补血作用
取SD雄性大鼠分成5组(正常组、贫血模型组、治疗组:四君子汤、四物汤、八珍汤组),贫血模型组与治疗组均于实验的第1、4、7d经皮下注射2%N-乙酰苯胼生理盐水溶液,首次剂量为20mg/100g体重,以后2次注射剂量减半,治疗组动物于实验第1d开始,每日灌胃给予四君子汤、四物汤、八珍汤,1ml/100g体重,对照组和贫血模型组灌服生理盐水,剂量同上,于第11d给药后1h,测定血红蛋白含量、红细胞数、白细胞数,并从腹主动脉取血2～3ml,3000r/min,离心10 min,取血清,进行湿法硝化,于电感耦合等离子体发射光谱仪上测定血清中微量元素,结果见表12-3-26、表12-3-27。

表12-3-26 四君子汤、四物汤、八珍汤对溶血性贫血大鼠的血液学指标影响(±s)

与正常组比较:△△P<0.01;与贫血组比较* P<0.05

表12-3-27 四君子汤、四物汤、八珍汤对贫血大鼠的血清TE影响(±s)

续表

与正常组比较:△P<0.05,△△P<0.01;与贫血组比较:* P<0.05
从表12-3-26可以看出,贫血大鼠经四君子汤、四物汤、八珍汤治疗后,其中以四君子汤补血作用最好,八珍汤次之,四物汤较差。从表13-3-27可以看出,贫血大鼠血清中微量元素含量较正常组为低,经四君子汤、四物汤、八珍汤治疗,以四君子汤改善作用最强,八珍汤次之,四物汤较差,且从血清Zn/Cu比值来看,亦是以贫血模型组为低,经补气,气血双补后均有所改善。实验研究表明,表于溶血性贫血大鼠的治疗以补气为优,气血双补次之,单纯的补血较差^[48]。
另有报道以失血造成家兔贫血模型,观察四君子汤的作用,结果表明四君子汤和四物汤组成的八珍汤组其红细胞数、血红蛋白、网织红细胞的增长率较对照组提高;对血压的影响,四君子汤可明显升高失血性家兔模型的血压,给药1～2h升压作用最为显著,升压作用持续12h以上^[49]。
大鼠灌服该方煎剂1周后,可见动物红细胞生成功能增强,能量代谢明显升高[50]。能提高CY所抑制的骨髓细胞数,以四君子汤为优。提示有形之血生于无形之气的中医气血理论是有科学依据的^[51]。
四君子汤可克服SCM中抑制物质(或因子)的抑制作用,而促使CSFs分泌,提高循环CSFs水平,进而刺激骨髓造血功能,刺激粒/单核巨噬细胞系及多向性骨髓祖细胞增殖,加速细胞生成、成熟或释放^[52]。
13.抗缺氧作用^[53]
13.1 对常压小鼠缺氧的作用
取健康小鼠20只,雌雄各半,体重20～25g,对照组给予生理盐水,实验组给予100%四君子汤,以口服给药0.2ml/10g,连续给药7d。最后1次给药15h后,放入250ml广口瓶密闭(瓶内放钠石灰10g,每瓶放入2只小鼠,总体重相近),观察小鼠存活时间,以呼吸停止为指标。结果显示,对照组存活时间为18.1±1.8min。四君子汤组为23.5±4.2min,P<0.01。
13.2 对亚硝酸钠中毒致小鼠缺氧的作用
取体重22～25g小鼠20只,分对照组和给药组,给药方法同上。末次给药15h后,两组均腹腔注入2%亚硝酸钠溶液0.1ml/10g,观察小鼠存活时间。结果表明,对照组存活时间为9.9±3.5min,四君子汤组为17.2±6.2min,P<0.01。
13.3 对异丙肾上腺素致耗氧增加的小鼠缺氧的作用
小鼠20只,体重22～25g。给药方法同前,末次给药15h后,腹腔注射异丙肾上腺素0.075ml/10g,15h后,放入广口瓶内密闭,观察小鼠存活时间。对照组为9.2±3.0min,给药组为13.8±3.3min,P<0.01。
13.4 抗氰化钾中毒致小鼠缺氧的作用
小鼠18只,体重22～25g,分为2组,给药方法同前。末次给药15h后,小鼠腹腔注入0.1%氰化钾溶液0.1 ml/10 g,记录小鼠存活时间。结果显示,对照组为2.7±0.8 min,四君子汤组为3.9±0.9 min, P<0.05。
13.5 抗结扎颈总动脉致小鼠缺氧的作用
取体重22～25 g小鼠18只,给药方法同前,末次给药15h后,乙醚浅麻醉,手术结扎两侧颈总动脉,术中保持无出血,观察小鼠存活时间。结果表明,对照组为1.8±1.2 min,四君子汤组为3.7±2.3 min, P<0.01。
14.抗衰老作用
14.1 抗氧化作用
将小鼠随机分为中药组(四君子汤合六味地黄丸组)、维生素E对照组和空白对照组。每组动物10只。中药组每只小鼠每克体重给药为0.02 ml,维生素E对照组小鼠每克体重给药为0.02 mg,空白对照组每只小鼠以0.5 ml的生理盐水灌胃,3组小鼠均每日给药1次,并自由取食饮水。3组小鼠分别灌胃10d,然后将动物移人体积为6m×6m×2.8m的相对密封的室内进行紫外线辐射,辐射强度为40瓦特,距离1m,每日1次,每次40 min。辐射期间仍继续给药,实验共20 d。到第21 d处死所有小鼠,并检测各组小鼠肝、脑、肺组织中的IPO含量和SOD活力。LPO含量测定用紫外分光光度法,SOD活力测定采用邻苯三酚法。统计学检验用t检验。结果见表12-3-28、表12-3-29。

表12-3-28 四君子汤等对紫外线辐射小鼠肝、脑、肺组织中LPO含量的影响(μmol/g蛋白质)(±s)

与空白组比较:* P<0.05,* * P<0.001

表12-3-29 四君子汤等对紫外线辐射小鼠肝、脑、肺组织中SOD含量的影响(μmol/g蛋白质)(±s)

与空白组比较:* P<0.05,* * P<0.01
实验结果可见,四君子汤合六味地黄丸煎剂,能较明显地降低小鼠肝、脑、肺组织中LPO含量,与空白组对照比较有显著性差异;而与维生素E组对照,除在降低肝、肺组织中LPO含量作用方面两者间无显著性差异外,在降低脑组织中LPO的含量方面,中药组的作用明显优于维生素E组。在对SOD活力的作用方面,四君子汤合六味地黄丸煎剂能明显提高小鼠肝、脑、肺组织中SOD活力,与空白组对照比较有显著性差异,而且在提高肝、肺组织中SOD活力的作用方面还优于维生素E组。从实验结果可以发现,维生素E虽然能直接阻断OFR对肝、肺组织的氧化损伤,但在提高SOD活力的作用方面效果较差;其在肝、肺组织中的SOD活力甚至低于空白组。四君子汤合六味地黄丸煎剂的作用可能在于能通过激发机体本身产生大量的SOD样作用,来达到抗氧化损伤的目的^[54]。
另有报道采用荧光偏振技术和荧光法,观察人参、黄芪、四君子汤对小鼠红细胞膜流动性和血清过氧化脂质及肝组织脂褐素的影响。结果表明三者均能明显降低红细胞膜荧光偏振度,即显著提高红细胞膜的流动性,均可减少血清中过氧化脂质和肝脏中脂褐素含量,对脂褐素的影响复方优于单味。提示人参、黄芪、四君子汤均有显著的抗衰老、抗氧化作用^[55]。
使小鼠吸入臭氧(O3),在体内诱发较强的自由基反应,导致一系列类似衰老的变化,四君子汤能增强SOD活力,促进自由基消除,抑制和降低单胺氧化酶B(MAO-B)和血浆、脑、肝LPO的形成,提高机体耐力、抗寒力、耐缺氧能力^[56]。
内毒素血症或内毒素休克时血清和肝脏LPO浓度明显升高,SOD活性明显下降,且伴有肝窦内大量白细胞聚集。体外实验发现内毒素与白细胞一起与肝匀浆孵育,才可明显增加肝LPO生成量,与对照组相比有统计学意义,且与内毒素呈剂量依赖关系。说明内毒素白细胞并用引起肝LPO生成的增加可能是通过内毒素激活白细胞释放大量活性氧,使肝细胞膜发生脂质过氧化而实现的。四君子汤能降低内毒素白细胞并用对肝匀浆LPO的生成量,且下降值比对照组低,推测本方可通过酶性或非酶性清除活性氧的途径消除内毒素激活白细胞释放的活性氧,从而防止了肝细胞膜的受损[57]。
临床研究也发现,用四君子汤治疗60例脾气虚型胃肠病患者,观察治疗前后血清总SOD、丙二醛(MDA)值,并与正常对照组比较。脾虚患者SOD低于对照组(P<0.01),而MDA偏高(P<0.01),治疗后与对照组无明显差异(P>0.05)。说明脾虚患者自由基清除能力下降,脂质过氧化反应增强,四君子汤能逆转此病理过程,提示本方一方面能改善脾气虚诱发自由基反应的各种因素,另一方面直接消除自由基或抑制其反应过程,从而阻止自由基反应对胃肠组织生物膜结构与功能的损伤[58]。
张氏等^[59]对60例用四君子汤治疗的脾气虚型消化疾病患者(简称脾气虚)进行了治疗前后血清SOD和丙二醛(MDA)的测定。60例住院的脾气虚患者,男27例,女33例,年龄17～71岁,平均38.5岁;病程10个月～30年,平均5.3年。其中以炎症为主者29例(慢性浅表性胃炎16例,慢性萎缩性胃炎3例,慢性十二指肠炎3例,慢性非感染性结肠炎7例),主要临床表现为:胃脘或少腹隐痛、大便溏薄、食欲减退、面色萎黄、舌胖有齿印、脉弱无力等;以溃疡为主者27例(慢性胃溃疡9例,慢性十指肠溃疡13例,结肠溃疡5例),主要临床表现为:胃脘隐痛,少腹坠胀,大便稀或兼潜血阳性,面色黄,乏力,舌淡苔白,脉弱无力等;以肿瘤为主者4例(胃癌、结肠癌各2例),主要临床表现为:胃脘或腹部疼痛且固定不移,食欲下降或进食困难,反胃或腑气不通,面色萎缩,肌瘦无力,少气懒言,自汗,舌淡,脉沉细弱。健康对照组50名,其中男22名,女28名,年龄18～45岁,平均39岁,均为同期体检的健康人。治疗方法:四君子汤由人参(红参)15～20g,白术、茯苓、炙甘草各20g组成。人参先煎40min,再与其他药物共煎30min,过滤,再共煎20min,共取400～500ml。每日晨空腹服,人参煎后取出嚼服。每日1剂,服药30d后评价疗效。检测方法:两组于晨分别采取空腹静脉血4.0ml。疗效标准:显效:患者所具有的上述症状、体征消失,舌象、脉象正常;有效:症状、体征、舌象、脉象好转;无效:症状、体征无改善。结果:显效27例,占45%;有效30例,占50%;无效3例,占5%。总有效率95%。SOD与MDA测定结果,见表12-3-30。脾气虚组治疗前血清总SOD显著低于对照组,P<0.01,而MDA则明显高于对照组,P<0.01;治疗前后比较均有显著性差异,P<0.01。

12-3-30 四君子汤对脾气虚型消化道病患者血清SOD和MDA的影响(x±s)

注:与对照组比较:* * P<0.01;与本组治疗前比较:△△P<0.01
14.2 抗自由基损伤的作用[60]
将30只小鼠完全随机平分为3组:四君子汤合金匮肾气汤组(简称中药组):每只小鼠按每克体重灌胃给药0.02ml的中药煎剂,每日1次,预先给药10d,然后移入体积为6m×6m×2.8m的相对密封的室内进行紫外光辐射,辐射强度为40瓦特,距离1m,每日1次,每次40min,共10d。辐射期间继续给药;维生素E组、对照组:每只小鼠每克体重灌胃给药0.02 mg维生素E,其余处理同中药组;空白对照组(简称空白组):每只小鼠以0.5 ml的生理盐水灌胃,余同中药组。实验前后共20 d,至第21 d将所有小鼠断脊处死,迅速分离出肝、脑、肺组织,分别称重后加10倍量的生理盐水在冰浴下以10 000 r/min的速度进行组织捣碎3 min,然后将匀浆用20 000 r/min的速度作低温(-15℃)超速离心30 min,最后取上清液备测。
3组小鼠肝、脑、肺组织中过氧化脂质含量(nmol/g蛋白质)比较。结果见表12-3-31。中药组和维生素E组小鼠肝、肺组织中的过氧化脂质含量分别明显低于空白对照组,P<0.05,但脑组织中的过氧化脂质含量与空白对照组无显著性差异,P>0.05。而中药组与维生素E组的小鼠肝、肺组织中的过氧化脂质含量无显著性差异,P>0.05,但脑组织中的过氧化脂质含量中药组则明显低于维生素E组,P<0.05^[60]。

表12-3-31 四君子汤合金匮肾气汤对小鼠肝、脑、肺组织中LPO含量的影响(nmol/g蛋白质,±s)

与对照组比较:* P<0.05;与VitE对照组比较:△P<0.05。
3组小鼠肝、脑、肺组织中超氧化物歧化酶活力(nmol/g蛋白质)比较。结果见表12-3-32。中药组小鼠肝、脑、肺组织中的SOD活力均显著高于空白对照组(P<0.05),且肝、肺组织中的SOD活力还明显高于VitE组(P<0.05)^[60]。

表12-3-32 四君子汤合金匮肾气肠对小鼠肝、脑、肺组织中SOD含量的影响(nmol/g蛋白质,±s)

与对照组比较:* P<0.05;与维生素E对照组比较:△P<0.05
实验结果表明:四君子汤合金匮肾气汤的煎剂能明显降低过氧化脂质在小鼠肝、肺组织中的堆积,具有较好的抗自由基损伤的作用。四君子汤合金匮肾气汤煎剂具有与维生素E相同强度的抗自由基损伤的作用,而在降低脑组织中过氧化脂质含量的作用方面则明显优于维生素E。在提高超氧化物歧化酶的作用方面,四君子汤合金匮肾气汤组小鼠肝、脑、肺组织中的超氧化物歧化酶的活力均显著高于对照组。说明四君子汤合金匮肾气汤的煎剂能提高小鼠这些组织中的超氧化物歧化酶的活力,中药对抗自由基损伤的机制可能主要是通过激发机体本身产生和提高超氧化物歧化酶的活力来进行的。而比较维生素E和对照组小鼠肝、脑、肺的组织中的超氧化物歧化酶的活力时可以发现,两者间并无显著性差异。
14.3 对老龄鼠的脑、肝组织的影响^[61]
龚氏用透射电镜观察四君子汤(制成0.6 g/ml的药液)对衰老小鼠的肝和大脑皮质超微结构的影响。ICR小鼠,雌雄各半,60 d龄,随机分为3组:对照组、模型组、用药组。动物喂养20 d后,取肝脏和左侧大脑半球中央前回皮层组织进行观察。结果:肝脏:模型组(置于浓度为0.9ppm的O3环境中):肝细胞核圆形,大多较对照组肝细胞核小,核基质较致密,细胞质中几乎不见糖原颗粒,常见和糖原颗粒大小一致的无包膜均质小体区域性分布,线粒体体积普遍缩小,未见脂褐素颗粒,毛细胞管微绒毛不发达。给药组(本方12 g/kg·d-1,置于浓度为0.9ppm的O3环境中):肝细胞核椭圆形,明显大于模型组肝细胞核,常染色质多,核仁明显,有双层核膜包裹。细胞质中有大量糖原颗粒,未见无包膜物质小体,线粒体丰满,结构正常,粗面内质网发达,位于线粒体之间,细胞边缘有时可见高尔基体。毛细胞管微绒毛发达,与对照组肝细胞结构一致。说明四君子汤能明显改善衰老模型小鼠的肝细胞的超微结构。大脑皮质(中央前回皮质第Ⅲ、Ⅳ层脑细胞):模型组锥体细胞和颗粒细胞胞体及轴、树突结构与对照组无明显差别,仅突触后膜稍见增厚。毛细血管内皮结构尚完好,但基质增厚,最厚处有150～170μm,并且可见贴附于基膜上的神经胶质细胞的突起明显肿胀,呈空泡状改变,其中几乎没有结构。给药组锥体细胞和颗粒细胞胞须及轴、树突结构与对照组相似,毛细血管内皮结构完整,基膜已恢复至正常厚度,60～70μm,且贴附于基膜上的神经胶质细胞突起肿胀已逐渐消失。研究中还发现衰老模型组小鼠的大脑皮质的血-脑屏障出现了不同程度的结构改变,四君子汤能使衰老小鼠的大脑皮质中的毛细血管内皮结构、基膜及神经胶质细胞突起结构恢复正常。提示四君子汤对脑组织的老化具有一定防治作用。
15.对去卵巢大鼠血清骨钙素(BGP)水平的影响^[62]
28只3月龄SD雌性大鼠随机分组:假手术组,去卵巢组和四君子汤药物组。实验90d,处死大鼠,心室取血,离心血清检测骨钙素。结果去卵巢组与假手术组比,BGP显著升高(P<0.01),四君子汤组与假手术组基本在同一水平,较去卵巢组低30%(P<0.01),表明四君子汤能抑制大鼠去卵巢90d血清骨钙素升高的变化。
16.对免疫功能的影响
16.1 对免疫器官的作用
用限制食量导致营养不足的方法造成幼鼠胸腺萎缩,功能减退,胸腺组织中DNA和RNA含量显著下降。本方可促进DNA、RNA合成,促进细胞分裂,加速萎缩胸腺结构恢复正常并增强其功能^[63]。从计量形态学指标观察,也发现本方对“气虚”小鼠的胸腺组织结构的恢复有明显促进作用,使“气虚”小鼠的胸腺皮质厚度、皮髓质厚度比、皮质细胞密度及皮质细胞核平均直径均有所增加。而对正常小鼠的胸腺结构无明显影响^[64]。
16.2 对脾细胞ADCC和NK活性的影响
实验分为空白对照组每天0.4mlNS灌胃7d;CY组:NS用法同上,于第4d腹腔注射CY(100mg/kg);CY+四君子汤:CY用法同上,四君子汤0.4ml/d(20g/kg)灌胃7d;四君子汤组:剂量方法同上。用同位素(51Cr、125I-UdR)释放法检测四君子汤对小鼠脾细胞ADCC和NK活性的影响。125I-UdR和Na251CrO4的放射性浓度分别为268-334mCi/ml和10.6～13.6mCi/ml。
16.2.1 四君子汤对小鼠脾细胞NK活性的影响^[65]
从表12-2-33结果可见:四君子汤组的NK活性高于空白对照组,但两组间无显著差异。当给小鼠腹腔注射CY后,其NK活性大幅度下降,当并用四君子汤后,NK活性显著升高,增强率达74.9%,但仍明显低于正常对照组,表明四君子汤能拮抗CY对小鼠脾细胞NK活性的抑制作用,但未能使其恢复至正常水平。

表12-3-33 四君子汤对小鼠脾细胞NK活性的影响

与CY组相比:* * P<0.01
16.2.2 四君子汤对小鼠脾细胞ADCC活性的影响^[65]
如表12-3-34所示,四君子汤组小鼠ADCC活性较对照明显为高,而CY组的ADCC活性则明显低于对照组,当CY合用四君子汤时ADCC活性显著提高,增强率为74.79%,已接近NS对照组,表明四君子汤不但能增强正常小鼠脾细胞的ADCC活性,还能使CY所致的小鼠脾细胞ADCC活性的降低恢复至接近正常水平。

表12-3-34 四君子汤对小鼠脾细胞ADCC活性的影响

与CY组相比:* *P<0.01
采用同位素释放检测了四君子汤对小鼠脾细胞的细胞毒功能的影响,结果表明,其对正常小鼠脾细胞ADCC和NK活性影响不全相同:对NK活性无明显影响,但对ADCC活性却能显著提高之。这种差异的原因可能有两点:一是四君子汤对抗体形成细胞有刺激作用,可使B细胞分化成更多的浆细胞,从而使抗体增加;二是四君子汤可能通过某种途径促进脾脏淋巴细胞(主要是K细胞)表面的Fc-R增加,以致能结合更多的抗体,而加强对靶细胞的杀伤作用,使该项指标更为敏感。
实验1次给小鼠大剂量注射CY后,ADCC和NK活性均显著降低,可用这种状况比拟中医理论中的“邪之所凑,其气必虚”。四君子汤能拮抗CY对小鼠脾细胞ADCC和NK活性的抑制作用,在CY造成的免疫抑制状态下,对这两种细胞毒活性具有同样的增强效应。
脾细胞的ADCC和NK活性在一定程度上反映了机体的免疫监视功能,与控制恶变细胞的增殖密切有关。肿瘤患者于中晚期大多呈虚证表现,其细胞免疫功能降低较明显,加上再应用化疗药物,更使免疫功能受抑,因而降低了对肿瘤生长的监视与控制作用。四君子汤不仅能提高正常小鼠脾细胞的ADCC活性,提示在肿瘤病人进行手术、放、化疗的同时,四君子汤可作为“扶正祛邪”的主要辅助治疗剂,以调整肿瘤患者的免疫功能,利于机体主动杀伤手术后残余的瘤细胞,从而达到“祛邪不伤正”之效。
16.3 对中性粒细胞功能的影响
近年的研究表明,中性粒细胞不仅是炎症过程中的重要细胞成分,而且能调节T细胞、B细胞、单核-巨噬细胞等多种免疫活性细胞功能,从而发挥重要的免疫调节作用。中性粒细胞本身在免疫和炎症过程中也起重要作用[66]。观察四君子汤及其组成中药在体外对人外周血中性粒细胞的功能的影响,发现四君子汤水提液在体外不同程度地抑制人外周血中性粒细胞的粘附,减低化学发光的强度,减少超氧阴离子的产生和血栓素B2的产生,中性粒细胞粘附于内皮细胞是中性粒细胞进入组织执行其功能的第一步,也是中性粒细胞活化的关键,中性粒细胞的粘附与其表面的粘附分子有关。四君子汤可能是通过改变中性粒细胞表面粘附分子的数量、亲和力或分布从而改变其粘附能力。这一作用可能使其成为治疗缺血后损伤和慢性炎症(都与中性粒细胞浸润有关)的新药。中性粒细胞的化学发光反映中性粒细胞内氧化过程和活性氧的产生。四君子汤对小量产生的活性氧的抑制作用或许与其抗衰老作用有关。血栓素A2(TXA2)在中性粒细胞活化时产生,TXA2有强烈的促进血小板聚集、血管收缩,促进凝血及血栓形成的作用,故与血瘀有关。四君子汤明显抑制TXA2的合成,可能是益气活血治则的药理基础之一[67]。
16.4 对腹腔巨噬细胞功能的影响^[68]
空白对照组,每天每只小鼠0.4ml生理盐水连续灌胃7d;环磷酰胺(CY)组,生理盐水用法同上,且第4d腹腔1次性注射CY(100mg/kg);四君子汤组,四君子汤每只0.4ml/d(相当于生药1g/ml),连续灌胃7d; CY加四君子汤组,CY和四君子汤用法同上。采用51Cr、125 Ⅰ-UdR释放方法检测四君子汤对免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞介导的肿瘤细胞溶解作用(WTC)和抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(ADCC)的影响,见表12-3-35。

表12-3-35 四君子汤对MTC、ADCC活性的影响

注:与CY组比较:* P<0.05,* * P<0.01
四君子汤组活性虽然高于空白对照组,但两者无明显差异,P>0.05。而CY组的活性明显低于空白对照组,P<0.01;当加用四君子汤后,活性显著升高,与单用CY组相比,差异有显著意义,P<0.05,增强率为74.40%。结果表明,四君子汤能拮抗CY对小鼠腹腔巨噬细胞介导的MTC活性的抑制作用,而对免疫功能正常的小鼠影响不大。
四君子汤组的ADCC活性最高,但与生理盐水组相比差异无显著性意义。而CY组ADCC活性最低,与空白对照组相比差异有非常显著性意义,P<0.01;加用四君子汤后与CY组相比,ADCC活性升高非常显著,P<0.01,已趋于正常,而增强率已达121.03%。从本实验结果来看,四君子汤对小鼠腹腔巨噬细胞介导的MTC和ADCC活性的影响有类似效应,所不同的是在免疫抑制状态下ADCC的敏感性要高于MTC。
16.5 对CY抑制的小鼠骨髓细胞计数的影响^[69]
给药第8d处死小鼠,分离右后肢股骨,剪去两端骨骺,用1ml 2%冰醋酸灌洗骨髓腔,将冲出的骨髓细胞稀释后计数,测得每根股骨所含细胞数×106。结果,空白对照组为3.4±0.7(n=7),CY组为19±0.7(n=6),和空白对照组比较P<0.05,CY+四君子汤CY+四君子汤以及CY+八珍汤,骨髓细胞数分别为3.5±2.1,2.5±1.1以及3.3±1.8(n均为6),和CY组比较P>0.05,但都有提高趋势。其中,四君子汤作用较好,四物汤作用最差。
16.6 对CY抑制的小鼠碳粒廓清速率的影响[69]
给药第5日每鼠尾静脉注射印度墨汁(用生理盐水稀释5倍)10ml/kg,注射后20min采血检测,计算廓清指数K。结果见表12-3-36。

表12-3-36 四君子汤对CY抑制的碳粒廓清速率的影响(x±s)

注:与生理盐水组比较:* P<0.05;和CY组比较:△P<0.05,△△P<0.01
上表结果表明,CY能抑制小鼠碳粒廓清速率。四君子汤能对抗CY抑制的碳粒廓清速率,和CY组比较,四君子汤组P<0.01。
16.7 对CY抑制的绵羊红细胞(SRBC)致敏小鼠溶血素生成的影响[69]
CY剂量为10mg/kg,腹腔注射,每日1次。于给药当日用10%SRBC0.2ml腹腔注射免疫小鼠,免疫后第5日眼球采血,分离血清检测,计算半数溶血值(HC50)。结果见表12-3-37。

表12-3-37 四君子汤对Cy抑制的SRBC致敏小鼠溶血素生成的影响(±s)

注:与生理盐水组比较:* *P<0.01;和CY组比较:△P<0.05。
上表结果显示,CY显著抑制溶血素生成。四君子汤能对抗Cy抑制溶血素生成的作用,P<0.05。
16.8 对环磷酰胺(CY)抑制的2,4-二硝基氯苯(DNCB)所致小鼠迟发型皮肤超敏反应(DCH)的影响^[69]。
取ICR小鼠分组,空白对照组每日按20ml/kg灌胃,连续10d,隔日以等容积生理盐水腹腔注射,CY组每日用生理盐水按20ml/kg灌胃,连续10d,隔日腹腔注射CY30mg/kg;四君子汤组按10g/kg的剂量灌胃,每日1次,连续10d,隔日分别腹腔注射CY30mg/kg,先用50%DNCB丙酮溶液在颈部致敏,10d后尾静脉注射1%伊文思蓝溶液10 ml/kg,30 min后处死小鼠,取腹部蓝染皮肤,剪碎,用丙酮生理盐水溶液浸泡24 h,离心,取上清液测OD值(λ=610nm),结果见表12-3-38。

表12-3-38 四君子汤对Cy抑制的DNCB所致小鼠DCH反应的影响(±s)

注:与生理盐水组比较:* P<0.05;与CY组比较:△P<0.05
上表结果表明,CY能抑制DNCB所致小鼠DCH反应。四君子汤能对抗CY抑制的DCH反应,P<0.05。
16.9 对氢化可的松(HC)抑制的淋巴细胞增殖试验的影响[69]
将C57 BL/6J小鼠6只断头放血处死,在65%酒精中浸泡后,无菌条件下取出脾脏,制备脾细胞悬液,将红细胞溶解后用含10%小牛血清的PRMI 1640培养液将脾细胞稀释为4×107/ml。向24孔培养板中分别加入脾细胞悬液100μl,50μg/ml ConA 100μl(终浓度5μg/ml),20mg/ml的四君子汤100μl(终浓度2mg/ml)。再分别加入2μg/ml HCl 100μl(终浓度2 mg/ml),每孔分别用RPMI 1640培养液补充至1 ml,同时设立不加HC和药物的正常对照组及不加药物的HC对照组。将培养板放入含有5%CO2的湿度饱和培养箱中,37℃培养44 h,从每孔中吸出上清液0.5 ml弃去,以减少小牛血清的含量,再加入0.4 mg/ml MTT0.5 ml(终浓度0.2mg/ml),继续培养4h,用752型分光光度计测OD值(λ=570 nm),结果见表12-3-39。

表12-3-39 四君子汤对HC抑制的淋巴细胞增殖的影响(±s)

注:HC终浓度为0.2μg/ml;四君子汤终浓度为2 mg/ml;与对照组比较:* P<0.05;与HC组比较:* * P<0.01
16.10 对脾虚患者血清可溶性细胞粘附分子-1水平及单核细胞功能的影响^[70]
细胞粘附分子(CAM)是位于多种细胞表面的一类大分子糖蛋白,它通过介导细胞与细胞间、细胞与细胞外基质间的粘附作用参与一系列生理、病理过程,发挥重要作用。在一些因素作用下,细胞粘附分子可以从细胞表面脱落进入血液循环,形成可溶性细胞粘附子分子(sICAM)。脾虚时可使多种细胞粘附分子表达发生变化,表现为免疫功能的低下。单核细胞和巨噬细胞能分泌白细胞介素15(IL-15),IL-15的分泌水平及其抗体依赖的单核细胞或巨噬细胞抗体依赖性介导的细胞毒反应(ADCC)是机体非特异性的免疫功能。章梅等观察66例脾虚患者血清可溶性细胞粘附分子-1(sICAM-1)的变化和单核细胞或巨噬细胞的功能状况及四君子汤对其影响。66例为中医科门诊与住院患者,均符合脾虚证辨证参考标准。即乏力,食后或午后腹胀,便溏,消瘦,面色不华,舌淡苔白,脉虚无力,具备3项以上。病程在0.5年以上。将66例脾虚患者随机分为两组,四君子汤治疗组和六味地黄汤治疗组。四君子汤治疗组33例,男16例,女17例,年龄32～59岁,平均为47.96±8.42岁。六味地黄汤治疗组33例,男18例,女15例,年龄31～61岁,平均为46.82±8.15岁。两组资料具有可比性。正常对照组15名,男8名,女7名,均来自血库健康献血者。给药方法:受试者停服中西药物1周,采用双盲法给药,经配对的患者按随机数字表达法分为四君子汤治疗组和六味地黄汤治疗组,由专人发药,服药剂量为200ml/次,浓度60g/L,每日2次,早晚空腹服用,疗程5～6周,于给药前后复查指标。结果见表12-3-40。

表12-3-40 四君子汤对脾虚患者sICAM-1、IL-15分泌和单核细胞ADCC的影响(x±s)

注:与正常对照组比较:* * P<0.01;与四君子汤治疗组比较,△△P<0.01
脾虚患者较正常对照组sICAM-1显著升高,IL-15、LPS刺激后IL-15分泌显著减少和ADCC明显低下,而四君子汤治疗后各指标与正常对照组无明显差异;六味地黄汤治疗组各指标则与治疗前无明显差异。
16.11 对脾虚肾脏病患者血清尿蛋白含量和细胞因子的影响^[71,72]
肾脏疾患可见血清和尿中有关蛋白质含量和细胞分子的变化,血清中β2微球蛋白(β2-MG)在TH精蛋白(THP),尿中β2-MG、THP、白蛋白(ALBUMIN)、TNF、IL-6、IL-8等作为衡量肾脏疾患病情程度与诊断等方面十分有价值的参考指标。章梅等观察了四君子汤对脾虚型肾脏病人血清及尿中有关蛋白质含量和细胞因子的变化。肾脏疾患组57人,其中男32人,女25人;慢性肾炎34人,肾病综合征10人,尿毒症1人,慢性肾盂肾炎6人,肾囊肿2人,紫癜肾4人,均符合脾虚证辨证参考标准。将其分为2组:脾虚组和六味地黄汤治疗组。脾虚组29人,男17人,女12人,年龄18～56岁;六味地黄汤治疗组28人,男14人,女14人,年龄17～56岁。正常对照组16人,男11人,女5人,年龄29～56岁,为健康查体者。
给药方法:受试者停服中西药物1周,采用双盲法给药,经配对的患者按随机数字表达法分为脾虚组和六味地黄汤治疗组。服药剂量为200ml/次,浓度均为60g/L,每日2次,早晚空腹服用;疗程5～6周,于给药前后复查指标。结果见表12-3-41,表12-3-42,表12-3-43。

表12-3-41 四君子汤对各组血β2-MG及THP含量的影响(±s)

注:与正常组相比:*P<0.05,**P<0.01;与脾虚组四君子汤治疗后相比:△P<0.05

表12-3-42 四君子汤对各组尿中有关蛋白质含量的影响(±s)

注:与正常组相比:*P<0.05,**P<0.01;与脾虚组四君子汤治疗后相比:△P<0.05

表12-3-43 四君子汤对各组尿中细胞因子含量的影响(±s)

人参 白术 ♂

人参 白术   10.人参 白术 : 【中医理论】
人参甘温,大补元气,尤善补脾肺之气。白术苦温,健脾燥湿。人参重在补元气,白术偏于补脾胃中气。两药合用,相须配对,补气健脾之功更强,且使中气、元气相互资生。

人参 百度百科(人参 百科) ♂

人参 百度百科(人参 百科)

人参果原产于南美洲安第斯山，原称“香瓜茄”，在中国引进后依据神话中的人参果改名而来。人参果的果实脆嫩多汁，清香味美，不仅含有丰富的钙和蛋白质，又有较低的糖类和脂肪，还含有硒和钻等18种人体所必需的微量元素，还有广泛的药理作用，且安全性高，具有广阔的市场前景。

毛人参是人参的一种，它有很高的药用价值，也有很高的营养价值。一般用作补品可以通过泡酒入药等等使用。

土人参的根茎看起来和真正的人参非常相似，颜色相近，尤其是晒干之后，几乎可以当作人参的赝品。

1、来源不同：人参属五加科人参干燥根及根茎，有园参、林下山参两种。白参是由人参加工而成的。

2、物理性不同：红参与白参相比较内容组织致密、坚固，储藏性良好。红参一般有效期限10年，白参2年左右。

人参性温，其既不属于热性，也不属于凉性。

人参主根高30~60厘米，圆柱形或纺锤形；茎直立，圆柱形，不分枝；复叶掌状，小叶3~5片；有小叶柄，小叶片椭圆形或微呈倒卵形；开伞形花序单一顶生叶丛中，小花梗长约0.5厘米；浆果扁圆形，成熟时鲜红色，内有两粒半圆形种子，花期5-6月，果期6-9月。它产于中国东北、朝鲜、韩国、日本、俄罗斯东部。

人参产地一般都是吉林长白山的最好。

人参 百科(人参属中药) ♂

人参 百科(人参属中药)

在电影《西游记之再世妖王》中，孙悟空再次遇到劲敌，不仅在五庄观犯下滔天大罪，还把封印在人参果树下的万妖之祖“元蒂”放出，当镇元子赶回也来不及封印住这邪祟，为了不祸害苍生，镇元子要求闯祸的猴子亲自去把元蒂消灭掉，可在元蒂幻化成人形之后，更是无人能敌，就连孙悟空也难以抗衡，可令人意外的是，元蒂最后却败给了“一股气”，这究竟是怎么一回事呢？

妖祖VS妖王

元蒂是谁？在这部电影里，编剧给大家有拟画出了一个新人物，他就是元蒂，首先元蒂是万兽之祖，也就是说混沌初始天地出现的第一只妖就是元蒂。而妖王就是孙悟空，孙悟空是石猴吸收天地之灵气幻化成的人形，后经菩萨指点走上修佛之道，而在此之前，孙悟空一直是被誉为所有妖怪的大王，也就是齐天大圣，因此元蒂和孙悟空两人根本不在同一级别上，所以孙悟空打不过元蒂也是很正常的！

元气镇守

起初元蒂和如来都是属于佛家人物，由于元蒂产生贪念想一统三界，为了维护三界六道的平衡，佛祖和玉皇大帝联手与之抗衡，最终佛祖门下得意弟子甘愿化成元气，将元蒂镇守在了镇元大仙的人参果树之下，直到孙悟空偷吃推倒树之后，元蒂才得以解封，但元蒂依旧是怕元气，毕竟万物均遵循相生相克的原理，再厉害的东西，都有他害怕的东西

五行相克

万物灵气之首为元气，所谓太极生两仪两仪生四象，四象生八卦！两仪是指天地或者是阴阳，也就是有相对立的一面，四象一般指的是太阳、太阴、少阳、少阴，从方向来说的话，就是大家常说的东南西北，如果按照季节来说就是春夏秋冬，如果用走兽来形容，那就是青龙、白虎、玄武、朱雀，最后的八卦就是集合阴阳五行的结合体，也就是大家平时算命说的八卦相，是用来推演空间逻辑、时间规律的一种方法！而元气是一个人的精气所在，也是五行中最有威力的一种精神产物，因此邪祟遇到真气会害怕就是属于相克的正常现象，毕竟邪不压正！所以元蒂不怕孙悟空却怕“一股气”就是这么由来的！

结语：

万物相生相克，再厉害的人物都有害怕的敌人，因此永远不要有自以为是的心态，因为比你厉害的人比比皆是，人也永远不要有满足感，当你一感觉满足之后，往往就是停滞不前的时候，而那时候被人超越也是很容易发生的，严重的还会被整个社会淘汰！

人参价格在大市场一般为80至180元每千克。药店另售者常翻二至三倍。

人参能在河北定州种植。人参主产吉林、辽宁、黑龙江等省，山东、山西、河北、湖北等省亦有栽培。

　　人参栽培条件：

　　1.种植环境

　　一般选择以柞树、椴树为主的阔叶林和针阔叶混交林。

　　人参喜冷凉气候，在年平均温度2.4～13.9℃，年降雨量500～2 000毫米条件下均可栽培。

　　2.土壤

　　有机质含量在3％以上的黄砂、黑砂腐殖土及壤土、砂质壤土，土壤ph值6.0～6.5，水、气、固三项体积比1:2:1。土壤中六六六浓度不得超过0.4毫克/公斤土、五氯硝基苯浓度不得超过0.3 毫克/公斤土。坡度为15度以内。使用隔年土，播种、移栽前做好土壤、种子、种苗消毒。

　　人参既不耐旱又不耐涝，土壤相对含水率在70％～80％以上为好。因此，搞好排灌极为重要。

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