引火归原(引火汤) -第一中药材网

引物（Primer）在聚合作用的起始时，可以刺激合成另一种大分子，并与反应物以共价键形式连接的序列。在核酸化学中，引物是一段短的单链RNA或DNA片段，可结合在核酸链上与之互补的区域，其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点，核酸聚合酶可由其3′端开始合成新的核酸链。体外人工设计的引物被广泛用于聚合酶链反应、测序和探针合成等。

自然中存在有生物的DNA复制引物（RNA引物）和聚合酶链式反应（PCR）中人工合成的引物（通常为DNA引物）。一般所说引物，指DNA引物，以下简称引物。

上游引物：DNA分子两端不一样，因为核苷酸分子不是对称的，5'位有个磷酸，3'位是-OH就是：磷酸端和羟基端。DNA复制总是从5’端到3’端，因为DNA聚合酶只能往3’端加核苷酸。所以谁先复制谁上游，往后的就是下游，上游下游是个相对概念，是某一个序列/碱基相对于另一个序列/碱基而言。上游引物是靠近5'端的，下游引物是靠近3‘端的。

DNA是双链，两个链是反向平行的，DNA聚合酶顺着其中一个链走，这个链就是负链，另一个链是反着一段一段复制的，这个是正链。

因为脱氧核糖核苷酸是由一分子的含氮的碱基,一分子的脱氧核糖,一分子的磷酸构成的.核糖的5'位有个磷酸,为磷酸端,3'位是-OH （羟基）,是羟基端.DNA连接就是前一个脱氧核糖核苷酸的羟基端与后一个的磷酸端相连,也就是从5'到3'端延伸.

可分为长产物片段和短产物片段两部分。短产物片段的长度严格地限定在两个引物链5'端之间,是需要扩增的特定片段。短产物片段和长产物片段是由于引物所结合的模板不一样而形成的,以一个原始模板为例,在第一个反应周期中,以两条互补的DNA为模板,引物是从3'端开始延伸,其5'端是固定的,3'端则没有固定的止点,长短不一,这就是“长产物片段”。段”。

可以自连的。可以使用碱性磷酸酶来做,但其实很多时候去磷酸化是根本不必要的.因为很多公司在合成引物的时候,在客户没有特殊要求的时候,引物的5‘端都是去磷酸化的,一般只有用户要求的时候,才会给合成磷酸化的5‘末端.所以PCR产物的5’端也是－OH而不是-P.从引物合成这里去去磷酸化比用碱性磷酸酶简单.

我们都知道，DNA复制需要DNA聚合酶，而DNA聚合酶的特点是不能从头合成DNA的一条链。也就是说不能从单个游离的脱氧核苷酸合成DNA链，因此要加入引物。所谓引物就是与DNA模板链互补的核苷酸片段，带有一个游离的-OH（羟基）末端，便于与游离的脱氧核苷酸结合，形成一个磷酸二酯键。所以没有引物，DNA就不能够复制。

1、退火温度低于引物Tm值5 ℃左右，一般在45～55℃。退火温度需要从多方面去决定，一般根据引物的Tm值（Tm值=4(G+C) +2(A+T)）为参考，根据扩增的长度适当下调作为退火温度。然后在此次实验基础上做出预估。退火温度对PCR的特异性有较大影响。

2、延伸时间：1min/kb(10kb内）。引物延伸一般在72℃进行（Taq酶最适温度）。但在扩增长度较短且退火温度较高时，本步骤可省略延伸时间随扩增片段长短而定，一般推荐在1000bp以上，含Pfu及其衍生物的衍生设定为1min/kbp。扩展资料PCR的过程：1、DNA变性：（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA2、退火：（60℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。

3、延伸：（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP为原料，从引物的3′端开始以从5′→3′端的方向延伸，合成与模板互补的DNA链。

糖的有氧氧化过程的第三阶段乙酰辅酶A进行三羧酸循环和氧化磷酸化。

.糖酵解：葡萄糖在无氧或缺氧条件下分解形成乳酸的过程。主要过程：1分子G（葡萄糖）→2分子3-磷酸甘油醛→丙酮酸→乳酸。（乳酸生成需要的NADH+H+来自3-磷酸甘油醛的脱氢反应）。

（1）细胞定位：胞液。

（2）能量生成：净生成2分子ATP。

（3）产物：乳酸。

（4）关键酶：己糖激酶（肝内称葡萄糖激酶）、磷酸果糖激酶-1、丙酮酸激酶。

（5）生理意义：成熟的红细胞没有线粒体，完全依赖糖酵解途径提供能量。

2.糖的有氧氧化过程

第一阶段：葡萄糖糖通过酵解途径生成丙酮酸。

第二阶段：丙酮酸通过氧化脱羧生成乙酰辅酶A。

第三阶段：乙酰辅酶A进行三羧酸循环和氧化磷酸化。

3.三羧酸循环

（1）定位：线粒体。

（2）底物：乙酰辅酶A。

（3）反应过程：4个脱氢反应，3个NADH，1个FADH2，2个脱羧反应，生成2分子CO2；1个底物水平磷酸化：琥珀酰CoA→琥珀酸。

（4）关键酶：柠檬酸合酶、异柠檬酸脱氢酶、α-酮戊二酸脱氢酶系（均催化不可逆反应）。

（5）最后一步反应产物：草酰乙酸和NADH+H+。

（6）能量生成：

一分子葡萄糖经过糖酵解生成2分子ATP；一分子葡萄糖彻底氧化分解生成30或32分子ATP；一分子乙酰CoA进入三羧酸循环生成10分子ATP。

4.糖原合成的限速酶是糖原合酶；糖原的分解的限速酶是磷酸化酶。

引物磷酸化的作用(引物磷酸化的作用是什么) ♂

引物磷酸化的作用(引物磷酸化的作用是什么)

因为葡萄糖磷酸化以后就会带上电荷，细胞膜对带电荷的物质是高度不通透的。带电的物质要想通过细胞膜，必须要经过膜上载体的搬运才可以。而细胞膜上缺乏搬运磷酸葡萄糖的载体蛋白。

PCR反应体系：

1. 缓冲液

标准的缓冲液含 1pmol/ml Tris ·HCl，其 pH 为 8.3-9.0（室温），而在延伸温度（72 ℃）下，pH 值接近 7.2 。缓冲液中含有一种二价阳离子，用于激活 DNA 聚合酶的活性中心，一般使用 Mg2+。

2.dNTP

脱氧核糖核苷三磷酸的缩写，是包括 dATP, dGTP, dTTP, dCTP 等在内的统称，即合成新的 DNA 链的材料。4 种 dNTP 的浓度相等，总浓度一般为 200pmol/ml （即饱和浓度）。dNTP 可与 Mg2+结合，使游离的 Mg2+浓度下降，影响 DNA 聚合酶的活性。

3. 引物

引物是一段短的单链 DNA 片段，可结合在核酸链上与之互补的区域，其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点，DNA 聚合酶可由其 3′端开始合成新的核酸链。引物长度一般以 18～30bp 为宜，过短则降低特异性，过长则会引起引物间的退火而影响有效扩增，同时也增加引物合成的成本。引物的碱基顺序不能与非扩增区有同源性。

4. 模板

模板是一段单链或者双链 DNA，提供用于进行 PCR 扩增的原始信息。对模板的纯度要求低，但不能混有蛋白酶、核酸酶、DNA 聚合酶抑制剂、DNA 结合蛋白等。模板 DNA 应该尽量保持低温保存。

5.Taq DNA 聚合酶

Taq DNA 聚合酶以 DNA 为复制模板，从将 DNA 由 5' 端点开始复制到 3' 端的酶。DNA 聚合酶的主要活性是催化 DNA 的合成（在具备模板、引物、dNTP 等的情况下）及其相辅的活性。必须一直保存于－20℃，内含甘油保存。最适反应温度 72 ℃，即延伸温度。通常在配制 PCR 体系的最后加入。

1、RNA大体可以分为三类：

（1）mRNA(信使RNA)。

（2）rRNA(核糖体RNA)。

（3）tRNA(转运RNA)。

2、不同的RNA有着不同的功能。

3、其中rRNA是核糖体的组成成分，由细胞核中的核仁合成，而mRNAtRNA在蛋白质合成的不同阶段分别执行着不同功能。

4、mRNA是以DNA的一条链为模板，以碱基互补配对原则，转录而形成的一条单链，主要功能是实现遗传信息在蛋白质上的表达，是遗传信息传递过程中的桥梁。

5、tRNA的功能是携带符合要求的氨基酸，以连接成肽链，再经过加工形成蛋白质。

而必须有一个多核苷酸链作为引物，DNA聚合酶只能在此引物的端催化dNTP与末端作用，形成磷酸二酯键。

解旋酶：解开双链DNA聚合酶：在这个酶作用下，碱基配对，形成新链。高中书上就介绍这两种酶ps：选修还介绍个Taq酶，作用和DNA聚合酶一样。

DNA聚合酶：单个核苷酸连到链上，形成磷酸二酯键。

DNA连接酶：冈崎片断之间连接，形成磷酸二酯键。